昆明医学院学报
昆明醫學院學報
곤명의학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF KUNMING MEDICAL COLLEGE
2009年
6期
35-38,56
,共5页
外源蛋白%溶解性表达%乙酸%葡萄糖%大肠杆菌
外源蛋白%溶解性錶達%乙痠%葡萄糖%大腸桿菌
외원단백%용해성표체%을산%포도당%대장간균
目的 研究在E.coli培养液添加葡萄糖增加外源蛋白的溶解性表达与其可能的机制.方法 将兔蛋白激酶C(PKCepsilon)催化功能域(PKCeC)基因重组入表达载体pUC18中,在大肠杆菌中以与蛋白A融合的形式表达,向表达培养液中添加不同浓度的葡萄糖、乙酸、磷酸盐等和改变诱导时间,用SDS-PAGE和Western blot检查PKCeC在细菌细胞浆和包涵体中的分布比例变化.结果 细菌培养液中添加匍萄糖最增加,兔PKCeC表达时间延后,胞浆中其溶解性表达量增加,伴随葡萄糖消耗发生的培养液pH降低;直接添加乙酸增强PKCeC溶解性的表达,在此基础上添加磷酸盐可以抵消乙酸增强溶解性表达的效用. 结论在培养液中添加葡萄糖可以有效地增加兔PKCeC蛋白在E.coli中的溶解性表达,其表达时间与添加葡萄糖量成正相关,并且葡萄糖的这种作用很可能与葡萄糖在细菌中代谢所伴随的乙酸生成所致的pH下降有关.
目的 研究在E.coli培養液添加葡萄糖增加外源蛋白的溶解性錶達與其可能的機製.方法 將兔蛋白激酶C(PKCepsilon)催化功能域(PKCeC)基因重組入錶達載體pUC18中,在大腸桿菌中以與蛋白A融閤的形式錶達,嚮錶達培養液中添加不同濃度的葡萄糖、乙痠、燐痠鹽等和改變誘導時間,用SDS-PAGE和Western blot檢查PKCeC在細菌細胞漿和包涵體中的分佈比例變化.結果 細菌培養液中添加匍萄糖最增加,兔PKCeC錶達時間延後,胞漿中其溶解性錶達量增加,伴隨葡萄糖消耗髮生的培養液pH降低;直接添加乙痠增彊PKCeC溶解性的錶達,在此基礎上添加燐痠鹽可以牴消乙痠增彊溶解性錶達的效用. 結論在培養液中添加葡萄糖可以有效地增加兔PKCeC蛋白在E.coli中的溶解性錶達,其錶達時間與添加葡萄糖量成正相關,併且葡萄糖的這種作用很可能與葡萄糖在細菌中代謝所伴隨的乙痠生成所緻的pH下降有關.
목적 연구재E.coli배양액첨가포도당증가외원단백적용해성표체여기가능적궤제.방법 장토단백격매C(PKCepsilon)최화공능역(PKCeC)기인중조입표체재체pUC18중,재대장간균중이여단백A융합적형식표체,향표체배양액중첨가불동농도적포도당、을산、린산염등화개변유도시간,용SDS-PAGE화Western blot검사PKCeC재세균세포장화포함체중적분포비례변화.결과 세균배양액중첨가포도당최증가,토PKCeC표체시간연후,포장중기용해성표체량증가,반수포도당소모발생적배양액pH강저;직접첨가을산증강PKCeC용해성적표체,재차기출상첨가린산염가이저소을산증강용해성표체적효용. 결론재배양액중첨가포도당가이유효지증가토PKCeC단백재E.coli중적용해성표체,기표체시간여첨가포도당량성정상관,병차포도당적저충작용흔가능여포도당재세균중대사소반수적을산생성소치적pH하강유관.
