生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2009年
4期
482-484
,共3页
赵勇%栗文彬%师长宏%张彩勤%缪珊%白冰%张海
趙勇%慄文彬%師長宏%張綵勤%繆珊%白冰%張海
조용%률문빈%사장굉%장채근%무산%백빙%장해
Atg5%原核表达%自噬%多克隆抗体
Atg5%原覈錶達%自噬%多剋隆抗體
Atg5%원핵표체%자서%다극륭항체
目的:克隆自噬相关基因Atg5,在大肠杆菌中重组表达后制备抗Atg5多克隆抗体.方法:用RT-PCR方法从RAW264.7细胞基因组中克隆Atg5基因,连接至pQE80L原核表达载体后转化大肠杆菌DH5a进行诱导表达,SDS-PAGE及Western blot鉴定表达蛋白;目的蛋白纯化后,以100 P4g/kg纯化的蛋白免疫新西兰兔,制备抗Atg5多克隆抗体;提取RAW264.7细胞总蛋白,以制备的抗Atg5多抗进行Western blot反应,检测多抗的生物学活性.结果:克隆了Atg5基因,在大肠杆菌中表达了重组Atg5,SDS-PAGE分析显示表达产物相对分子质量与预期值一致,Western blot结果证明该产物具有较高的生物学活性,纯化蛋白免疫动物后制备了抗Atg5多克隆抗体.结论:在大肠杆菌中表达了重组Atg5,制备了抗Atg5多克隆抗体,为自噬的检测和研究提供了工具.
目的:剋隆自噬相關基因Atg5,在大腸桿菌中重組錶達後製備抗Atg5多剋隆抗體.方法:用RT-PCR方法從RAW264.7細胞基因組中剋隆Atg5基因,連接至pQE80L原覈錶達載體後轉化大腸桿菌DH5a進行誘導錶達,SDS-PAGE及Western blot鑒定錶達蛋白;目的蛋白純化後,以100 P4g/kg純化的蛋白免疫新西蘭兔,製備抗Atg5多剋隆抗體;提取RAW264.7細胞總蛋白,以製備的抗Atg5多抗進行Western blot反應,檢測多抗的生物學活性.結果:剋隆瞭Atg5基因,在大腸桿菌中錶達瞭重組Atg5,SDS-PAGE分析顯示錶達產物相對分子質量與預期值一緻,Western blot結果證明該產物具有較高的生物學活性,純化蛋白免疫動物後製備瞭抗Atg5多剋隆抗體.結論:在大腸桿菌中錶達瞭重組Atg5,製備瞭抗Atg5多剋隆抗體,為自噬的檢測和研究提供瞭工具.
목적:극륭자서상관기인Atg5,재대장간균중중조표체후제비항Atg5다극륭항체.방법:용RT-PCR방법종RAW264.7세포기인조중극륭Atg5기인,련접지pQE80L원핵표체재체후전화대장간균DH5a진행유도표체,SDS-PAGE급Western blot감정표체단백;목적단백순화후,이100 P4g/kg순화적단백면역신서란토,제비항Atg5다극륭항체;제취RAW264.7세포총단백,이제비적항Atg5다항진행Western blot반응,검측다항적생물학활성.결과:극륭료Atg5기인,재대장간균중표체료중조Atg5,SDS-PAGE분석현시표체산물상대분자질량여예기치일치,Western blot결과증명해산물구유교고적생물학활성,순화단백면역동물후제비료항Atg5다극륭항체.결론:재대장간균중표체료중조Atg5,제비료항Atg5다극륭항체,위자서적검측화연구제공료공구.
