医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2011年
6期
501-505
,共5页
刘俊花%石磊%朱悦伟%贺宝霞%赵树进
劉俊花%石磊%硃悅偉%賀寶霞%趙樹進
류준화%석뢰%주열위%하보하%조수진
高分辨率熔解曲线%正交试验%单核苷酸多态性
高分辨率鎔解麯線%正交試驗%單覈苷痠多態性
고분변솔용해곡선%정교시험%단핵감산다태성
目的 建立CYP4A11 8590T＞C单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)检测方法.方法先采用温度梯度PCR,确定适宜的退火温度;再利用正交试验,优化引物、DNA模板量和Mg2+量,最终确定PCR反应体系和反应条件.通过对607例无血缘关系的受试者基因组DNA进行HRM分析,并随机选择50例产物测序.结果 引物最适退火温度为57.8 ℃;PCR最佳反应体系为20 μl,包括2×conc dNTP mix 10 μl,上下游引物(10 μmol/L)各0.5 μl,DNA溶液(30 ng/μl)1.0 μl,Mg2+(2.5 mmol/L)1.5 μl和灭菌水6.5 μl.607例受试者中CYP4A11 8590TT、TC和CC基因型频率分别为54.7 %、37.6 %和7.7 %.结论该正交试验优化的HRM技术可用于检测CYP4A11 8590T＞C单核苷酸多态性,且其分析结果和测序结果一致.
目的 建立CYP4A11 8590T＞C單覈苷痠多態性(single nucleotide polymorphism,SNP)的高分辨率鎔解麯線(high resolution melting,HRM)檢測方法.方法先採用溫度梯度PCR,確定適宜的退火溫度;再利用正交試驗,優化引物、DNA模闆量和Mg2+量,最終確定PCR反應體繫和反應條件.通過對607例無血緣關繫的受試者基因組DNA進行HRM分析,併隨機選擇50例產物測序.結果 引物最適退火溫度為57.8 ℃;PCR最佳反應體繫為20 μl,包括2×conc dNTP mix 10 μl,上下遊引物(10 μmol/L)各0.5 μl,DNA溶液(30 ng/μl)1.0 μl,Mg2+(2.5 mmol/L)1.5 μl和滅菌水6.5 μl.607例受試者中CYP4A11 8590TT、TC和CC基因型頻率分彆為54.7 %、37.6 %和7.7 %.結論該正交試驗優化的HRM技術可用于檢測CYP4A11 8590T＞C單覈苷痠多態性,且其分析結果和測序結果一緻.
목적 건립CYP4A11 8590T＞C단핵감산다태성(single nucleotide polymorphism,SNP)적고분변솔용해곡선(high resolution melting,HRM)검측방법.방법선채용온도제도PCR,학정괄의적퇴화온도;재이용정교시험,우화인물、DNA모판량화Mg2+량,최종학정PCR반응체계화반응조건.통과대607례무혈연관계적수시자기인조DNA진행HRM분석,병수궤선택50례산물측서.결과 인물최괄퇴화온도위57.8 ℃;PCR최가반응체계위20 μl,포괄2×conc dNTP mix 10 μl,상하유인물(10 μmol/L)각0.5 μl,DNA용액(30 ng/μl)1.0 μl,Mg2+(2.5 mmol/L)1.5 μl화멸균수6.5 μl.607례수시자중CYP4A11 8590TT、TC화CC기인형빈솔분별위54.7 %、37.6 %화7.7 %.결론해정교시험우화적HRM기술가용우검측CYP4A11 8590T＞C단핵감산다태성,차기분석결과화측서결과일치.
