重组结核分枝杆菌ESAT6-PPE68融合蛋白的制备
중조결핵분지간균ESAT6-PPE68융합단백적제비
Preparation of recombinant Mycobacterium tuberculosis ESAT6-PPE68 fusion protein
  • 万方数据
    南方医科大学学报 남방의과대학학보
    JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
    2007年 2期 131-135 ,共5页

    李红霞%陈建平%曾林子%刘刚%姚卫%杨筠%刘杨椅%王涛%田玉

    리홍하%진건평%증림자%류강%요위%양균%류양의%왕도%전옥

    结核分枝杆菌%esat6-ppe68融合基因%rESAT6-PPE68融合蛋白%原核表达 結覈分枝桿菌%esat6-ppe68融閤基因%rESAT6-PPE68融閤蛋白%原覈錶達
    결핵분지간균%esat6-ppe68융합기인%rESAT6-PPE68융합단백%원핵표체
    目的 构建结核分支杆菌esat6-ppe68融合基因及其原核表达载体,在大肠杆菌中表达融合蛋白ESAT6-PPE68.方法 用基因拼接(GeneSOEing)法扩增esat6-ppe68融合基因,并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒pGesat6-ppe68.重组子经限制性内切酶分析、聚合酶链式反应及测序鉴定后转化宿主菌大肠杆菌BL21,IPTG(异丙基-β-D硫代半乳糖苷)诱导表达约69 000带谷胱苷肽硫转移酶蛋白(GST)标签的正SAT6-PPE68融合蛋白,经谷胱苷肽-硫-转移酶融合蛋白纯化试剂盒得到纯化的融合蛋白,产物进行SDS-PAGE电泳、Western-blotting鉴定.结果 重组质粒pGesat6-ppe68中目的基因测序结果与报道序列完全相同;在大肠杆菌中以可溶性非包涵体形式表达;表达量约占菌体总蛋白的40%,表达蛋白纯化后获得纯度为90%左右的重组蛋白;Westernblotting结果证实重组蛋白与确诊的结核病患者血清发生特异免疫反应.结论 成功构建了原核表达载体pGesat6-ppe68,获得了rESAT6-PPE68融合蛋白,为rESAT6-PPE68融合蛋白在结核病诊断中的应用奠定了基础.
    목적 구건결핵분지간균esat6-ppe68융합기인급기원핵표체재체,재대장간균중표체융합단백ESAT6-PPE68.방법 용기인병접(GeneSOEing)법확증esat6-ppe68융합기인,병장기정향극륭지원핵표체재체pGEX-4T-1,구건원핵표체중조질립pGesat6-ppe68.중조자경한제성내절매분석、취합매련식반응급측서감정후전화숙주균대장간균BL21,IPTG(이병기-β-D류대반유당감)유도표체약69 000대곡광감태류전이매단백(GST)표첨적정SAT6-PPE68융합단백,경곡광감태-류-전이매융합단백순화시제합득도순화적융합단백,산물진행SDS-PAGE전영、Western-blotting감정.결과 중조질립pGesat6-ppe68중목적기인측서결과여보도서렬완전상동;재대장간균중이가용성비포함체형식표체;표체량약점균체총단백적40%,표체단백순화후획득순도위90%좌우적중조단백;Westernblotting결과증실중조단백여학진적결핵병환자혈청발생특이면역반응.결론 성공구건료원핵표체재체pGesat6-ppe68,획득료rESAT6-PPE68융합단백,위rESAT6-PPE68융합단백재결핵병진단중적응용전정료기출.
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