CAJ | 학술논문

用6月龄大月份流产的新鲜肝脏组织为材料,提取总RNA,通过反转录得到Cdna,并以此为模板,经PCR得到人Angiostatin基因的AK(1-3)片段.将此PCR产物直接与载体Pmd18-T连接,转化大肠杆菌DH5α.经蓝白菌落筛选,PCR和酶切检测,筛选出阳性克隆,命名为Pmda,测序证明克隆序列与GenBank发表序列一致,大小为858 bp.用SalⅠ和BglⅡ酶切将该基因插入载体Pqe40,并转化宿主菌M15[Prep4].经质粒电泳PCR和酶切检测筛选阳性克隆,得到表达载体Pqea,插入基因与载体上小鼠DHFR基因重组形成嵌合基因.在30 ℃,2×YT培养基(Kan25μg/Ml+Amp200μg/Ml),2 mmol/L IPTG条件下诱导Pqea/ M15[Prep4]表达.所得菌体总蛋白经SDS-PAGE分析,结果表明,在预期的61kD处得到一条特异带,为AK(1-3)Cdna与载体固有基因DHFR-6хHis的重组蛋白表达产物.实验结果为抗肿瘤药物的研制提供了条件.
용6월령대월빈유산적신선간장조직위재료,제취총RNA,통과반전록득도Cdna,병이차위모판,경PCR득도인Angiostatin기인적AK(1-3)편단.장차PCR산물직접여재체Pmd18-T련접,전화대장간균DH5α.경람백균락사선,PCR화매절검측,사선출양성극륭,명명위Pmda,측서증명극륭서렬여GenBank발표서렬일치,대소위858 bp.용SalⅠ화BglⅡ매절장해기인삽입재체Pqe40,병전화숙주균M15[Prep4].경질립전영PCR화매절검측사선양성극륭,득도표체재체Pqea,삽입기인여재체상소서DHFR기인중조형성감합기인.재30 ℃,2×YT배양기(Kan25μg/Ml+Amp200μg/Ml),2 mmol/L IPTG조건하유도Pqea/ M15[Prep4]표체.소득균체총단백경SDS-PAGE분석,결과표명,재예기적61kD처득도일조특이대,위AK(1-3)Cdna여재체고유기인DHFR-6хHis적중조단백표체산물.실험결과위항종류약물적연제제공료조건.