中国临床康复
中國臨床康複
중국림상강복
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATION
2005年
6期
56-58
,共3页
杨民%蔡善保%马庆军%郭均%党耕町
楊民%蔡善保%馬慶軍%郭均%黨耕町
양민%채선보%마경군%곽균%당경정
骨折愈合%骨形态发生蛋白质类%腺病毒,人%基因治疗
骨摺愈閤%骨形態髮生蛋白質類%腺病毒,人%基因治療
골절유합%골형태발생단백질류%선병독,인%기인치료
目的:构建重组人骨形态发生蛋白7的腺病毒载体(AdBMP7),并观察其在小鼠成肌细胞C2C12细胞中的表达情况.方法:实验于2004-05/10在北京大学医学部完成.RT-PCR方法从HKE293细胞中克隆出hBMP7 cDNA并亚克隆入穿梭质粒pAdtrackcmv中,构建pAdtrackcmv-hBMP7质粒.该质粒和腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183菌中进行同源重组后挑选阳性重组体pAd-hBMP7质粒.线性化pAd-hBMP7质粒转染293A细胞后检测病毒噬斑形成情况,并于转染后9 d收获病毒,大量扩增并制备高纯度、高滴度的AdBMP7.将AdBMP7按MOI=100来感染C2C12细胞,48 h后分别应用RT-PCR和免疫组化方法来检测hBMP7在mRNA和蛋白水平的表达.结果:成功克隆出hBMP7 cDNA,酶切鉴定pAdtrackcmv-hBMP7和pAd-hBMP7质粒正确重组,获得纯化后滴度达到5×1012vp/mL的AdBMP7.AdBMP7能有效感染C2C12细胞并表达hBMP7蛋白.结论:应用AdEasy-1腺病毒载体系统可在短期内制备高滴度的携带GFP和hBMP7的重组腺病毒AdBMP7,并在为进一步研究BMP7基因治疗促进骨愈合打下基础.
目的:構建重組人骨形態髮生蛋白7的腺病毒載體(AdBMP7),併觀察其在小鼠成肌細胞C2C12細胞中的錶達情況.方法:實驗于2004-05/10在北京大學醫學部完成.RT-PCR方法從HKE293細胞中剋隆齣hBMP7 cDNA併亞剋隆入穿梭質粒pAdtrackcmv中,構建pAdtrackcmv-hBMP7質粒.該質粒和腺病毒骨架質粒pAdEasy-1在BJ5183菌中進行同源重組後挑選暘性重組體pAd-hBMP7質粒.線性化pAd-hBMP7質粒轉染293A細胞後檢測病毒噬斑形成情況,併于轉染後9 d收穫病毒,大量擴增併製備高純度、高滴度的AdBMP7.將AdBMP7按MOI=100來感染C2C12細胞,48 h後分彆應用RT-PCR和免疫組化方法來檢測hBMP7在mRNA和蛋白水平的錶達.結果:成功剋隆齣hBMP7 cDNA,酶切鑒定pAdtrackcmv-hBMP7和pAd-hBMP7質粒正確重組,穫得純化後滴度達到5×1012vp/mL的AdBMP7.AdBMP7能有效感染C2C12細胞併錶達hBMP7蛋白.結論:應用AdEasy-1腺病毒載體繫統可在短期內製備高滴度的攜帶GFP和hBMP7的重組腺病毒AdBMP7,併在為進一步研究BMP7基因治療促進骨愈閤打下基礎.
목적:구건중조인골형태발생단백7적선병독재체(AdBMP7),병관찰기재소서성기세포C2C12세포중적표체정황.방법:실험우2004-05/10재북경대학의학부완성.RT-PCR방법종HKE293세포중극륭출hBMP7 cDNA병아극륭입천사질립pAdtrackcmv중,구건pAdtrackcmv-hBMP7질립.해질립화선병독골가질립pAdEasy-1재BJ5183균중진행동원중조후도선양성중조체pAd-hBMP7질립.선성화pAd-hBMP7질립전염293A세포후검측병독서반형성정황,병우전염후9 d수획병독,대량확증병제비고순도、고적도적AdBMP7.장AdBMP7안MOI=100래감염C2C12세포,48 h후분별응용RT-PCR화면역조화방법래검측hBMP7재mRNA화단백수평적표체.결과:성공극륭출hBMP7 cDNA,매절감정pAdtrackcmv-hBMP7화pAd-hBMP7질립정학중조,획득순화후적도체도5×1012vp/mL적AdBMP7.AdBMP7능유효감염C2C12세포병표체hBMP7단백.결론:응용AdEasy-1선병독재체계통가재단기내제비고적도적휴대GFP화hBMP7적중조선병독AdBMP7,병재위진일보연구BMP7기인치료촉진골유합타하기출.
