CAJ | 학술논문

目的:为标记人间充质干细胞,探讨用反转录病毒转染人间充质干细胞的可行性.方法:实验于2003-10/2004-07在全军创伤修复重点实验室完成,无菌条件下穿刺人髂后上嵴抽取骨髓,采用直接贴壁法分离纯化人间充质干细胞,体外扩增,分别用免疫细胞化学法及流式细胞仪法对培养的人间充质干细胞进行鉴定.以含不完整反转录病毒、增强型绿色荧光蛋白、G418抗性基因的pLEGFP-C1为载体,用阳离子脂质体介导法转染包装细胞PT67,收集新鲜的含重组反转录病毒载体的PT67上清,加入终浓度为6 mg/L的Polybrene感染人间充质干细胞,荧光显微镜观察.结果:体外原代培养的人间充质干细胞,24 h内有少量成纤维样细胞贴壁,7 d达到融合,免疫细胞化学示CD44和CD105表达阳性,CD34表达阴性,部分人间充质干细胞核5-溴脱氧尿嘧啶尿苷染色阳性.流式细胞仪示CD44阳性率为89.64%,CD34为0.11%.用脂质体介导法转染包装细胞PT67,有少量发绿色荧光细胞,通过G418筛选和有限稀释后,筛选出单克隆的转染PT67细胞.用含不完整重组反转录病毒颗粒的PT67上清,转染人间充质干细胞,有少量人间充质干细胞发绿光,转染后的人间充质干细胞增殖速度减慢.结论:虽然人间充质干细胞已用于许多临床前和临床研究,但观察结果表明用反转录病毒载体转染人间充质干细胞,转染率低,转染后的细胞增殖速度减慢,为下一步组织工程皮肤的研究提供了另一方面的理论依据.
목적:위표기인간충질간세포,탐토용반전록병독전염인간충질간세포적가행성.방법:실험우2003-10/2004-07재전군창상수복중점실험실완성,무균조건하천자인가후상척추취골수,채용직접첩벽법분리순화인간충질간세포,체외확증,분별용면역세포화학법급류식세포의법대배양적인간충질간세포진행감정.이함불완정반전록병독、증강형록색형광단백、G418항성기인적pLEGFP-C1위재체,용양리자지질체개도법전염포장세포PT67,수집신선적함중조반전록병독재체적PT67상청,가입종농도위6 mg/L적Polybrene감염인간충질간세포,형광현미경관찰.결과:체외원대배양적인간충질간세포,24 h내유소량성섬유양세포첩벽,7 d체도융합,면역세포화학시CD44화CD105표체양성,CD34표체음성,부분인간충질간세포핵5-추탈양뇨밀정뇨감염색양성.류식세포의시CD44양성솔위89.64%,CD34위0.11%.용지질체개도법전염포장세포PT67,유소량발록색형광세포,통과G418사선화유한희석후,사선출단극륭적전염PT67세포.용함불완정중조반전록병독과립적PT67상청,전염인간충질간세포,유소량인간충질간세포발록광,전염후적인간충질간세포증식속도감만.결론:수연인간충질간세포이용우허다림상전화림상연구,단관찰결과표명용반전록병독재체전염인간충질간세포,전염솔저,전염후적세포증식속도감만,위하일보조직공정피부적연구제공료령일방면적이론의거.