CAJ | 학술논문

本研究克隆了来源于马铃薯Y病毒坏死株系(PVYN)外壳蛋白(CP)基因(PVYN CP)5'端和3'端的反向重复cDNA序列,并构建了植物表达载体pROKII-5'IR和pROKII-3'IR,利用农杆菌介导的叶盘法转化烟草NC89,分别获得166和126株转基因烟草.抗病性试验表明,转化PVYN CP基因3'端茎50 bp(环50 bp)hpRNA(hairpin RNA)的烟草抗病率达69%,而转化PVYN CP基因5'端相同片段长度的hpRNA的烟草却全部发病.Southern blot结果表明,转基因植株的抗病性与转基因的拷贝数之间无明显的相关性;Northern blot结果表明,目的片段转录产物的积累量与植株的抗病性呈负相关,证明所获得的抗病性是RNA介导的抗病性.研究结果证明PVYN CP基因的3'端比5'端更能有效地诱发基因沉默,并且hpRNA茎部的长度可减少到50 bp.该结果为探索利用CP基因的最短长度和有效部位的基因片段来培育多抗病毒转基因植物提供了依据.
본연구극륭료래원우마령서Y병독배사주계(PVYN)외각단백(CP)기인(PVYN CP)5'단화3'단적반향중복cDNA서렬,병구건료식물표체재체pROKII-5'IR화pROKII-3'IR,이용농간균개도적협반법전화연초NC89,분별획득166화126주전기인연초.항병성시험표명,전화PVYN CP기인3'단경50 bp(배50 bp)hpRNA(hairpin RNA)적연초항병솔체69%,이전화PVYN CP기인5'단상동편단장도적hpRNA적연초각전부발병.Southern blot결과표명,전기인식주적항병성여전기인적고패수지간무명현적상관성;Northern blot결과표명,목적편단전록산물적적루량여식주적항병성정부상관,증명소획득적항병성시RNA개도적항병성.연구결과증명PVYN CP기인적3'단비5'단경능유효지유발기인침묵,병차hpRNA경부적장도가감소도50 bp.해결과위탐색이용CP기인적최단장도화유효부위적기인편단래배육다항병독전기인식물제공료의거.