华西药学杂志
華西藥學雜誌
화서약학잡지
WEST CHINA JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES
2007年
3期
251-254
,共4页
方丽%王振达%张平%赵宗蓉%章崇杰
方麗%王振達%張平%趙宗蓉%章崇傑
방려%왕진체%장평%조종용%장숭걸
甲胎蛋白%单域抗体%克隆%表达
甲胎蛋白%單域抗體%剋隆%錶達
갑태단백%단역항체%극륭%표체
目的 构建抗甲胎蛋白(AFP)重链可变区(VH)单域抗体融合蛋白基因在大肠杆菌中的表达,并初步鉴定表达产物的活性.方法 从已构建的抗AFP单链抗体(ScFv)的载体中,经PCR扩增出VH 单域抗体基因,再克隆到融合蛋白表达载体pET32a(+)中进行表达;用SDS-PAGE及Western-blot鉴定表达产物;并通过竞争抑制ELISA分析TrxA-VH融合蛋白的结合活性;细胞免疫组化染色分析其内化及结合情况.结果 VH 单域抗体基因全长339 bp,将其克隆到pET32a(+)中,转化大肠杆菌可获得高效表达,Western-blot证实在相应分子质量处,有TrxA-VH融合蛋白的显色条带.经初步纯化和复性后,获得抗AFP的VH单域抗体融合蛋白.竞争抑制ELISA及细胞免疫组化证明,表达产物具有与AFP特异结合的活性.结论 成功构建了抗AFP的VH单域抗体融合蛋白,为临床的应用研究奠定了基础.
目的 構建抗甲胎蛋白(AFP)重鏈可變區(VH)單域抗體融閤蛋白基因在大腸桿菌中的錶達,併初步鑒定錶達產物的活性.方法 從已構建的抗AFP單鏈抗體(ScFv)的載體中,經PCR擴增齣VH 單域抗體基因,再剋隆到融閤蛋白錶達載體pET32a(+)中進行錶達;用SDS-PAGE及Western-blot鑒定錶達產物;併通過競爭抑製ELISA分析TrxA-VH融閤蛋白的結閤活性;細胞免疫組化染色分析其內化及結閤情況.結果 VH 單域抗體基因全長339 bp,將其剋隆到pET32a(+)中,轉化大腸桿菌可穫得高效錶達,Western-blot證實在相應分子質量處,有TrxA-VH融閤蛋白的顯色條帶.經初步純化和複性後,穫得抗AFP的VH單域抗體融閤蛋白.競爭抑製ELISA及細胞免疫組化證明,錶達產物具有與AFP特異結閤的活性.結論 成功構建瞭抗AFP的VH單域抗體融閤蛋白,為臨床的應用研究奠定瞭基礎.
목적 구건항갑태단백(AFP)중련가변구(VH)단역항체융합단백기인재대장간균중적표체,병초보감정표체산물적활성.방법 종이구건적항AFP단련항체(ScFv)적재체중,경PCR확증출VH 단역항체기인,재극륭도융합단백표체재체pET32a(+)중진행표체;용SDS-PAGE급Western-blot감정표체산물;병통과경쟁억제ELISA분석TrxA-VH융합단백적결합활성;세포면역조화염색분석기내화급결합정황.결과 VH 단역항체기인전장339 bp,장기극륭도pET32a(+)중,전화대장간균가획득고효표체,Western-blot증실재상응분자질량처,유TrxA-VH융합단백적현색조대.경초보순화화복성후,획득항AFP적VH단역항체융합단백.경쟁억제ELISA급세포면역조화증명,표체산물구유여AFP특이결합적활성.결론 성공구건료항AFP적VH단역항체융합단백,위림상적응용연구전정료기출.
