中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
4期
18-22
,共5页
许静%刁世勇%张磊%徐洁%孟磊
許靜%刁世勇%張磊%徐潔%孟磊
허정%조세용%장뢰%서길%맹뢰
链亲和素%单链抗体%融合蛋白%表达载体
鏈親和素%單鏈抗體%融閤蛋白%錶達載體
련친화소%단련항체%융합단백%표체재체
利用基因重组技术将链亲和素(core-streptavidin)cDNA插入原核表达载体pOPE101-8E5的3'端,并用单链抗体scFv-C4的重链和轻链可变区cDNA取代其scFv-8E5,构建重组表达载体pOPE101-C4::core-streptavidin.将该表达载体转化入在大肠杆菌中进行诱导表达,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法分析表达产物的表达量和产物活性.结果提示成功地获得一个分子量约为45kDa的scFv-C4::core-streptavidin的融合蛋白,它可结合KG1a细胞裂解物中分子量约为60kDa、45kDa的蛋白带,且其结合功能可以通过融合蛋白中的链亲和素基因直接测定.
利用基因重組技術將鏈親和素(core-streptavidin)cDNA插入原覈錶達載體pOPE101-8E5的3'耑,併用單鏈抗體scFv-C4的重鏈和輕鏈可變區cDNA取代其scFv-8E5,構建重組錶達載體pOPE101-C4::core-streptavidin.將該錶達載體轉化入在大腸桿菌中進行誘導錶達,用聚丙烯酰胺凝膠電泳和免疫印跡法分析錶達產物的錶達量和產物活性.結果提示成功地穫得一箇分子量約為45kDa的scFv-C4::core-streptavidin的融閤蛋白,它可結閤KG1a細胞裂解物中分子量約為60kDa、45kDa的蛋白帶,且其結閤功能可以通過融閤蛋白中的鏈親和素基因直接測定.
이용기인중조기술장련친화소(core-streptavidin)cDNA삽입원핵표체재체pOPE101-8E5적3'단,병용단련항체scFv-C4적중련화경련가변구cDNA취대기scFv-8E5,구건중조표체재체pOPE101-C4::core-streptavidin.장해표체재체전화입재대장간균중진행유도표체,용취병희선알응효전영화면역인적법분석표체산물적표체량화산물활성.결과제시성공지획득일개분자량약위45kDa적scFv-C4::core-streptavidin적융합단백,타가결합KG1a세포렬해물중분자량약위60kDa、45kDa적단백대,차기결합공능가이통과융합단백중적련친화소기인직접측정.
