CAJ | 학술논문

目的:研究大鼠肝卵圆细胞(HOC)增殖模型肝脏缝隙连接蛋白32,43(CX)的表达及缝隙连接细胞间通讯(GJIC)的功能,探讨HOC增殖的可能机制.方法:健康♂Wistar大鼠,随机分成正常对照组(n=6),模型组.模型组大鼠按每天20 mg/kg剂量灌喂2-AFF,连续4 d,第5天不灌喂行2/3肝切除,术后次日按每天20 mg/kg剂量继续灌喂5 d(2-AFF/PH).模型组在术后4 h,4,8,12和16 d随机取6只大鼠检测.采用组织病理技术观察肝组织的形态学变化;免疫组化和细胞形态学方法计数HOC;切开标记/染料示踪技术(incision loading/dye transfer, IL/DT)技术确定GJIC;免疫组化及RT-PCR技术检测CX32蛋白及mRNA表达;免疫组化、Western blot及RT-PCR技术分析CX43蛋白及mRNA水平.结果:对照组及模型组4 h未见HOC增殖.模型组4 d汇管区有HOC增殖反应,8 d HOC增殖达峰值,12 d HOC从汇管区向肝实质内浸润,16 d HOC增殖减少较12 d减少;IL/DT检测结果显示,模型组各时点(4 h,4,8,12和16 d)染料扩散距离低于对照组(84.5±3.4,60.6±3.3,108.6±4.2,150.6±2.6,199.6±3.7 μm vs 250.0±5.0 μm,P＜0.01),GJIC功能降低.模型组各时点CX32表达均低于对照组(P＜0.05),在4 h下调,4 d达低峰(2.85±0.39),8 d后逐渐恢复;RT-PCR显示模型组CX32 mRNA在4 h开始下降,4 d达低峰(0.33±0.11),8 d后逐渐恢复,16 d高于对照组,但无显著差异(P＞0.05).Western blot结果显示模型组CX43蛋白表达在4 h上调(P＞0.05)、4-16 d明显升高;RT-PCR显示模型组4 h CX43 mRNA上调(P＞0.05),4 d表达明显升高,12 d达高峰(5.46±0.58),16 d低于对照组,但无显著差异(P＞0.05).结论:采用Solt-Farber方法成功建立了HOC增殖动物模型;大鼠2-AAF/PH肝脏CX表达呈时空特异性变化,使肝脏GJIC功能抑制.肝脏的GJIC抑制可能启动了HOC增殖.
목적:연구대서간란원세포(HOC)증식모형간장봉극련접단백32,43(CX)적표체급봉극련접세포간통신(GJIC)적공능,탐토HOC증식적가능궤제.방법:건강♂Wistar대서,수궤분성정상대조조(n=6),모형조.모형조대서안매천20 mg/kg제량관위2-AFF,련속4 d,제5천불관위행2/3간절제,술후차일안매천20 mg/kg제량계속관위5 d(2-AFF/PH).모형조재술후4 h,4,8,12화16 d수궤취6지대서검측.채용조직병리기술관찰간조직적형태학변화;면역조화화세포형태학방법계수HOC;절개표기/염료시종기술(incision loading/dye transfer, IL/DT)기술학정GJIC;면역조화급RT-PCR기술검측CX32단백급mRNA표체;면역조화、Western blot급RT-PCR기술분석CX43단백급mRNA수평.결과:대조조급모형조4 h미견HOC증식.모형조4 d회관구유HOC증식반응,8 d HOC증식체봉치,12 d HOC종회관구향간실질내침윤,16 d HOC증식감소교12 d감소;IL/DT검측결과현시,모형조각시점(4 h,4,8,12화16 d)염료확산거리저우대조조(84.5±3.4,60.6±3.3,108.6±4.2,150.6±2.6,199.6±3.7 μm vs 250.0±5.0 μm,P＜0.01),GJIC공능강저.모형조각시점CX32표체균저우대조조(P＜0.05),재4 h하조,4 d체저봉(2.85±0.39),8 d후축점회복;RT-PCR현시모형조CX32 mRNA재4 h개시하강,4 d체저봉(0.33±0.11),8 d후축점회복,16 d고우대조조,단무현저차이(P＞0.05).Western blot결과현시모형조CX43단백표체재4 h상조(P＞0.05)、4-16 d명현승고;RT-PCR현시모형조4 h CX43 mRNA상조(P＞0.05),4 d표체명현승고,12 d체고봉(5.46±0.58),16 d저우대조조,단무현저차이(P＞0.05).결론:채용Solt-Farber방법성공건립료HOC증식동물모형;대서2-AAF/PH간장CX표체정시공특이성변화,사간장GJIC공능억제.간장적GJIC억제가능계동료HOC증식.