CAJ | 학술논문

目的:观察K562细胞红系分化过程中miR-451表达的变化,探讨miR-451在红细胞(RBC)形成过程中的作用.方法:应用Northern印迹法分析小鼠不同组织细胞(肝、骨髓、红细胞、白细胞)及人RBC、鸡RBC中miR-451的表达情况.采用氯高铁血红素(hemin,50 μmol/L)诱导K562细胞红系分化,诱导36 h后应用联苯胺染色及血红蛋白mRNA RT-PCR鉴定K562细胞红系分化结果,采用Northern印迹法及茎环RT-PCR分析K562细胞经hemin诱导不同时间点(24、48、72、96 h)miR-451表达的变化.结果:除红细胞外,小鼠白细胞、肝脏及骨髓Northern印迹均未检测到miR-451表达;人RBC及具有细胞核的鸡RBC亦检测到miR-451表达.小鼠及人RBC检测到2种miR-451,发现了1条较Sanger中心报道的序列3′端多1个尿嘧啶的miR-451序列.50 μmol/L hemin诱导后K562细胞出现红系分化,与诱导前相比,诱导36 h后联苯胺染色阳性细胞增多(P＜0.05),γ、δ及ε血红蛋白表达增加(P＜0.05).Northern印迹未能检测到K562细胞诱导前后miR-451表达变化,但更敏感的茎环RT-PCR分析显示,诱导前K562细胞本身低丰度表达miR-451,hemin诱导24 h后,miR-451表达丰度开始增加,随着血红蛋白(δ-globin)表达增加,miR-451表达进一步增加,72 h达高峰.结论:miR-451是红系分化终末特异高表达的miRNA,在人及小鼠RBC中均存在相差1个碱基的2种序列,其在K562细胞红系分化过程中表达升高.
목적:관찰K562세포홍계분화과정중miR-451표체적변화,탐토miR-451재홍세포(RBC)형성과정중적작용.방법:응용Northern인적법분석소서불동조직세포(간、골수、홍세포、백세포)급인RBC、계RBC중miR-451적표체정황.채용록고철혈홍소(hemin,50 μmol/L)유도K562세포홍계분화,유도36 h후응용련분알염색급혈홍단백mRNA RT-PCR감정K562세포홍계분화결과,채용Northern인적법급경배RT-PCR분석K562세포경hemin유도불동시간점(24、48、72、96 h)miR-451표체적변화.결과:제홍세포외,소서백세포、간장급골수Northern인적균미검측도miR-451표체;인RBC급구유세포핵적계RBC역검측도miR-451표체.소서급인RBC검측도2충miR-451,발현료1조교Sanger중심보도적서렬3′단다1개뇨밀정적miR-451서렬.50 μmol/L hemin유도후K562세포출현홍계분화,여유도전상비,유도36 h후련분알염색양성세포증다(P＜0.05),γ、δ급ε혈홍단백표체증가(P＜0.05).Northern인적미능검측도K562세포유도전후miR-451표체변화,단경민감적경배RT-PCR분석현시,유도전K562세포본신저봉도표체miR-451,hemin유도24 h후,miR-451표체봉도개시증가,수착혈홍단백(δ-globin)표체증가,miR-451표체진일보증가,72 h체고봉.결론:miR-451시홍계분화종말특이고표체적miRNA,재인급소서RBC중균존재상차1개감기적2충서렬,기재K562세포홍계분화과정중표체승고.