CAJ | 학술논문

目的比较三种不同的分离诱导外周血树突状细胞(DC)成熟的方法.方法取正常成人外周血约180 ml,分成三组.分离单核细胞后,经典脂多糖(LPS)诱导组(A组):接种于含RPMI1640+胎牛血清完全培养基的25 cm2培养瓶中,2h后弃悬浮细胞,将贴壁单核细胞,用粒-巨噬细胞集落刺激因子和白介素4培养,培养到第6天时加入LPS诱导24h;鸡尾酒诱导组(B组):单核细胞的培养同A组,培养到第6天时用细胞因子组合(1000U/ml肿瘤坏因子、10ng/ml白介素6、10mg/ml白介素1β、1μg/ml前列腺素E2)诱导24h;自体血清+鸡尾酒诱导组(C组):单核细胞用RPMI1640+10%自体血清完全培养基培养,诱导方法同B组.用流式细胞仪检测各组收集的DC细胞成熟表型CD80、CD86、CD83以及白细胞表面抗原HLA-DR的表达;动态观察各组细胞成熟过程中形态的改变以及其激活淋巴细胞增殖的能力.结果 C组DC成熟过程中形态好、突起多;其成熟表型CD86、CD83、CD80以及HLA-DR的平均表达率分别是(88.60±6.34)%、(50.55±4.03)%、(73.89±6.15)%、(93.24±7.78)%,明显高于A、B组(P＜0.05);激活淋巴细胞增殖指数为2.03,亦明显高于A、B组(P＜0.05).结论自体血清+鸡尾酒诱导法是一种简单、方便、经济的外周血DC分离诱导成熟的新方法.
목적 비교삼충불동적분리유도외주혈수돌상세포(DC)성숙적방법.방법 취정상성인외주혈약180 ml,분성삼조.분리단핵세포후,경전지다당(LPS)유도조(A조):접충우함RPMI1640+태우혈청완전배양기적25 cm2배양병중,2h후기현부세포,장첩벽단핵세포,용립-거서세포집락자격인자화백개소4배양,배양도제6천시가입LPS유도24h;계미주유도조(B조):단핵세포적배양동A조,배양도제6천시용세포인자조합(1000U/ml종류배인자、10ng/ml백개소6、10mg/ml백개소1β、1μg/ml전렬선소E2)유도24h;자체혈청+계미주유도조(C조):단핵세포용RPMI1640+10%자체혈청완전배양기배양,유도방법동B조.용류식세포의검측각조수집적DC세포성숙표형CD80、CD86、CD83이급백세포표면항원HLA-DR적표체;동태관찰각조세포성숙과정중형태적개변이급기격활림파세포증식적능력.결과 C조DC성숙과정중형태호、돌기다;기성숙표형CD86、CD83、CD80이급HLA-DR적평균표체솔분별시(88.60±6.34)%、(50.55±4.03)%、(73.89±6.15)%、(93.24±7.78)%,명현고우A、B조(P＜0.05);격활림파세포증식지수위2.03,역명현고우A、B조(P＜0.05).결론 자체혈청+계미주유도법시일충간단、방편、경제적외주혈DC분리유도성숙적신방법.