CAJ | 학술논문

以小麦单核期花药为材料,比较了两种不同蛋白质提取方法TCA/丙酮法和酚提取法及不同的蛋白质裂解液组成对双向电泳的影响,并在蛋白质上样量和SDS-PAGE胶浓度等方面也进行了探索与优化.结果表明,采用TCA/丙酮提取法比用酚提取法提取的蛋白质所得的2-DE胶图谱上蛋白质点数增加,图谱背景也比较清晰;样品溶解于含有硫脲和TBP的蛋白质裂解液Ⅱ中,可显著提高蛋白质的溶解性,在2-DE图谱上可分辨出554个蛋白质点,比用蛋白质裂解液Ⅰ提取的蛋白多39个点.以TCA-丙酮法提取小麦花药组织中的蛋白,用蛋白质裂解液Ⅱ[7mol/L尿素、2mol/L硫脲、4%CHAPS、2%TBP、65mmol/L DTT、0.2%载体两性电解质(其中0.1%pH 3～10,0.1%pH4～6)]溶解蛋白,以pH4～7线性17cm的IPG胶条进行双向凝胶电泳,在上样量为800μg,13%SDS-PAGE胶浓度下,蛋白质得到了更好的分离,2-DE图谱上可分辨出631个蛋白点,图谱质量最佳.优化后的双向电泳技术体系,适合于小麦花药全蛋白质的双向电泳分析.
이소맥단핵기화약위재료,비교료량충불동단백질제취방법TCA/병동법화분제취법급불동적단백질렬해액조성대쌍향전영적영향,병재단백질상양량화SDS-PAGE효농도등방면야진행료탐색여우화.결과표명,채용TCA/병동제취법비용분제취법제취적단백질소득적2-DE효도보상단백질점수증가,도보배경야비교청석;양품용해우함유류뇨화TBP적단백질렬해액Ⅱ중,가현저제고단백질적용해성,재2-DE도보상가분변출554개단백질점,비용단백질렬해액Ⅰ제취적단백다39개점.이TCA-병동법제취소맥화약조직중적단백,용단백질렬해액Ⅱ[7mol/L뇨소、2mol/L류뇨、4%CHAPS、2%TBP、65mmol/L DTT、0.2%재체량성전해질(기중0.1%pH 3～10,0.1%pH4～6)]용해단백,이pH4～7선성17cm적IPG효조진행쌍향응효전영,재상양량위800μg,13%SDS-PAGE효농도하,단백질득도료경호적분리,2-DE도보상가분변출631개단백점,도보질량최가.우화후적쌍향전영기술체계,괄합우소맥화약전단백질적쌍향전영분석.