科技导报
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과기도보
SCIENCE & TECHNOLOGY REVIEW
2009年
12期
19-22
,共4页
融合基因%克隆%表达%绿脓杆菌外毒素A催化区
融閤基因%剋隆%錶達%綠膿桿菌外毒素A催化區
융합기인%극륭%표체%록농간균외독소A최화구
以pEKH-F3质粒为模板,PCR扩增F3片段,将F3插入克隆质粒PQE80L,转化大肠杆菌,筛选,获得含有F3的PQE80L重组载体的克隆.提取绿脓杆菌菌株染色体DNA为模板,PCR扩增绿脓杆菌外毒素A催化区,PE40.然后将PQE80-F3和PE40重组,得到表达PQE80L-F3-PE40载体.转化至大肠杆菌DH5a,BL21,表达融合蛋白F3-PE40.结果显示,大肠杆菌表达了融合蛋白F3-PE40,表达的融合蛋白量大概占菌体总体蛋白量的20%.通过质粒提取、PCR扩增构建F3-PE40表达载体转化大肠杆菌,成功地表达了融合蛋白F3-PE40,为大规模表达、纯化F3-PE40的进一步功能奠定了基础.
以pEKH-F3質粒為模闆,PCR擴增F3片段,將F3插入剋隆質粒PQE80L,轉化大腸桿菌,篩選,穫得含有F3的PQE80L重組載體的剋隆.提取綠膿桿菌菌株染色體DNA為模闆,PCR擴增綠膿桿菌外毒素A催化區,PE40.然後將PQE80-F3和PE40重組,得到錶達PQE80L-F3-PE40載體.轉化至大腸桿菌DH5a,BL21,錶達融閤蛋白F3-PE40.結果顯示,大腸桿菌錶達瞭融閤蛋白F3-PE40,錶達的融閤蛋白量大概佔菌體總體蛋白量的20%.通過質粒提取、PCR擴增構建F3-PE40錶達載體轉化大腸桿菌,成功地錶達瞭融閤蛋白F3-PE40,為大規模錶達、純化F3-PE40的進一步功能奠定瞭基礎.
이pEKH-F3질립위모판,PCR확증F3편단,장F3삽입극륭질립PQE80L,전화대장간균,사선,획득함유F3적PQE80L중조재체적극륭.제취록농간균균주염색체DNA위모판,PCR확증록농간균외독소A최화구,PE40.연후장PQE80-F3화PE40중조,득도표체PQE80L-F3-PE40재체.전화지대장간균DH5a,BL21,표체융합단백F3-PE40.결과현시,대장간균표체료융합단백F3-PE40,표체적융합단백량대개점균체총체단백량적20%.통과질립제취、PCR확증구건F3-PE40표체재체전화대장간균,성공지표체료융합단백F3-PE40,위대규모표체、순화F3-PE40적진일보공능전정료기출.
