CAJ | 학술논문

目的构建结核分枝杆菌rv1837c、rv3803c基因原核表达重组质粒,进行表达、纯化,并分析其免疫原性.方法 PCR扩增结核分枝杆菌H37Rv rv1837c、rv3803c基因,并克隆入pTA2质粒.测序正确后,再亚克隆入pET30a(+)质粒,构建pET30a(+):rv1837c、pET30a(+):rv3803c重组体.然后转化入表达宿主大肠杆菌B121(DE3),经0.4 mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导;分别与组氨酸标签单克隆抗体及结核患者血清进行Western blot,鉴定Rv1837c、Rv3803c重组蛋白.经镍离子螫和氮川乙酸-组氨酸标签亲和树脂纯化,将纯化的重组蛋白分别免疫家兔,取兔血清与纯化蛋白通过Western blot方法,检测家兔血清中的抗体.结果 pET30a(+):rv1837c、pET30a(+):rv3803c重组体表达相对分子质量为92000及38 000的重组蛋白,表达蛋白以包涵体形式存在于胞质中,表达量分别占全菌蛋白质的30%及50%.获得纯度为90%的重组蛋白.纯化蛋白通过Western blot鉴定证实为目的蛋白,有较强的免疫原性.结论成功构建原核表达重组质粒pET30a(+):rv1837c、pET30a(+):rv3803c,并获得Rv1837c及Rv3803c重组蛋白,为血清学诊断活动性结核病奠定了基础.
목적 구건결핵분지간균rv1837c、rv3803c기인원핵표체중조질립,진행표체、순화,병분석기면역원성.방법 PCR확증결핵분지간균H37Rv rv1837c、rv3803c기인,병극륭입pTA2질립.측서정학후,재아극륭입pET30a(+)질립,구건pET30a(+):rv1837c、pET30a(+):rv3803c중조체.연후전화입표체숙주대장간균B121(DE3),경0.4 mmol/L이병기류대-β-D-반유당감유도;분별여조안산표첨단극륭항체급결핵환자혈청진행Western blot,감정Rv1837c、Rv3803c중조단백.경얼리자석화담천을산-조안산표첨친화수지순화,장순화적중조단백분별면역가토,취토혈청여순화단백통과Western blot방법,검측가토혈청중적항체.결과 pET30a(+):rv1837c、pET30a(+):rv3803c중조체표체상대분자질량위92000급38 000적중조단백,표체단백이포함체형식존재우포질중,표체량분별점전균단백질적30%급50%.획득순도위90%적중조단백.순화단백통과Western blot감정증실위목적 단백,유교강적면역원성.결론 성공구건원핵표체중조질립pET30a(+):rv1837c、pET30a(+):rv3803c,병획득Rv1837c급Rv3803c중조단백,위혈청학진단활동성결핵병전정료기출.