暨南大学学报（自然科学与医学版）
暨南大學學報（自然科學與醫學版）
기남대학학보（자연과학여의학판）
JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE & MEDICINE EDITION）
2010年
2期
105-110
,共6页
关艺青%禹艳红%黄丹%潘善培
關藝青%禹豔紅%黃丹%潘善培
관예청%우염홍%황단%반선배
附睾%辅脂酶%原核表达%抗体
附睪%輔脂酶%原覈錶達%抗體
부고%보지매%원핵표체%항체
目的:利用原核表达系统重组表达小鼠附睾特异性辅脂酶(meClps),并制备抗meClps抗体.方法:通过生物信息分析meClpe蛋白结构,Oligo 6设计引物,PCR法从小鼠附睾cDNA中扩增meClps全长序列并克隆到pMD19-T载体中.将含meClps序列pMD19-T载体通过PCR扩增成熟肽区段序列,重组到pET-21b原核表达载体上,经菌落PCR及测序鉴定后,转化到表达菌株E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导蛋白表达后用Tricine-SDS-PAGE和Western blotting检测重组meClps的表达.包涵体沉淀经浓度为2 mol/L尿素洗涤,Tricine-SDS-PAGE分离、染色、脱色,切下目的条带用生理盐水浸泡、磨碎与弗氏佐剂混合后免疫新西兰大白兔获取免疫血清,Western blotting检测抗体与meClps反应.结果:在原核表达系统成功重组表达meClpe,目的蛋白主要以包涵体形式存在,制备了高效价的兔抗meClps抗体.结论:成功建立meClps的原核表达系统和获得兔抗mops抗体.
目的:利用原覈錶達繫統重組錶達小鼠附睪特異性輔脂酶(meClps),併製備抗meClps抗體.方法:通過生物信息分析meClpe蛋白結構,Oligo 6設計引物,PCR法從小鼠附睪cDNA中擴增meClps全長序列併剋隆到pMD19-T載體中.將含meClps序列pMD19-T載體通過PCR擴增成熟肽區段序列,重組到pET-21b原覈錶達載體上,經菌落PCR及測序鑒定後,轉化到錶達菌株E.coli BL21(DE3),經IPTG誘導蛋白錶達後用Tricine-SDS-PAGE和Western blotting檢測重組meClps的錶達.包涵體沉澱經濃度為2 mol/L尿素洗滌,Tricine-SDS-PAGE分離、染色、脫色,切下目的條帶用生理鹽水浸泡、磨碎與弗氏佐劑混閤後免疫新西蘭大白兔穫取免疫血清,Western blotting檢測抗體與meClps反應.結果:在原覈錶達繫統成功重組錶達meClpe,目的蛋白主要以包涵體形式存在,製備瞭高效價的兔抗meClps抗體.結論:成功建立meClps的原覈錶達繫統和穫得兔抗mops抗體.
목적:이용원핵표체계통중조표체소서부고특이성보지매(meClps),병제비항meClps항체.방법:통과생물신식분석meClpe단백결구,Oligo 6설계인물,PCR법종소서부고cDNA중확증meClps전장서렬병극륭도pMD19-T재체중.장함meClps서렬pMD19-T재체통과PCR확증성숙태구단서렬,중조도pET-21b원핵표체재체상,경균락PCR급측서감정후,전화도표체균주E.coli BL21(DE3),경IPTG유도단백표체후용Tricine-SDS-PAGE화Western blotting검측중조meClps적표체.포함체침정경농도위2 mol/L뇨소세조,Tricine-SDS-PAGE분리、염색、탈색,절하목적조대용생리염수침포、마쇄여불씨좌제혼합후면역신서란대백토획취면역혈청,Western blotting검측항체여meClps반응.결과:재원핵표체계통성공중조표체meClpe,목적단백주요이포함체형식존재,제비료고효개적토항meClps항체.결론:성공건립meClps적원핵표체계통화획득토항mops항체.
