中国农业科技导报
中國農業科技導報
중국농업과기도보
REVIEW OF CHINA AGRICULTURAL SCIENCE AND TECHNOLOGY
2011年
2期
53-58
,共6页
董世雷%刘伟%朱立颖%王学琴%于宏伟%王欣
董世雷%劉偉%硃立穎%王學琴%于宏偉%王訢
동세뢰%류위%주립영%왕학금%우굉위%왕흔
OmpT%克隆与表达%外膜蛋白酶%抗菌肽
OmpT%剋隆與錶達%外膜蛋白酶%抗菌肽
OmpT%극륭여표체%외막단백매%항균태
OmpT(Outer-membrane proteases T)是革兰氏阴性细菌分泌到细胞表面具有丝氨酸蛋白酶活性的一种重要蛋白.利用大肠杆菌OmpT降解抗菌肽特性来筛选和改造新型抗菌肽,可以为开发抗OmpT蛋白酶水解新抗菌肽序列提供新的思路和创造条件.根据大肠杆菌外膜蛋白酶OmpT的基因序列设计一对引物,应用聚合酶链式反应(PCR)方法,从大肠杆菌K12基因组中扩增获得一段为954 bp的序列,测序结果显示此序列与已公布序列同源性达99.99%.将其序列定向克隆到原核表达载体pET28a上构建重组表达质粒pET28a-OmpT.经IPTG诱导后,在表达宿主菌中特异性的表达出分子量约为36 kDa且具有生物活性的OmpT蛋白.生长曲线试验显示,抗菌肽LL37对带重组表达质粒pET28a-OmpT的大肠杆菌生长没有影响,而对照组的生长明显受到抗菌肽的抑制作用.
OmpT(Outer-membrane proteases T)是革蘭氏陰性細菌分泌到細胞錶麵具有絲氨痠蛋白酶活性的一種重要蛋白.利用大腸桿菌OmpT降解抗菌肽特性來篩選和改造新型抗菌肽,可以為開髮抗OmpT蛋白酶水解新抗菌肽序列提供新的思路和創造條件.根據大腸桿菌外膜蛋白酶OmpT的基因序列設計一對引物,應用聚閤酶鏈式反應(PCR)方法,從大腸桿菌K12基因組中擴增穫得一段為954 bp的序列,測序結果顯示此序列與已公佈序列同源性達99.99%.將其序列定嚮剋隆到原覈錶達載體pET28a上構建重組錶達質粒pET28a-OmpT.經IPTG誘導後,在錶達宿主菌中特異性的錶達齣分子量約為36 kDa且具有生物活性的OmpT蛋白.生長麯線試驗顯示,抗菌肽LL37對帶重組錶達質粒pET28a-OmpT的大腸桿菌生長沒有影響,而對照組的生長明顯受到抗菌肽的抑製作用.
OmpT(Outer-membrane proteases T)시혁란씨음성세균분비도세포표면구유사안산단백매활성적일충중요단백.이용대장간균OmpT강해항균태특성래사선화개조신형항균태,가이위개발항OmpT단백매수해신항균태서렬제공신적사로화창조조건.근거대장간균외막단백매OmpT적기인서렬설계일대인물,응용취합매련식반응(PCR)방법,종대장간균K12기인조중확증획득일단위954 bp적서렬,측서결과현시차서렬여이공포서렬동원성체99.99%.장기서렬정향극륭도원핵표체재체pET28a상구건중조표체질립pET28a-OmpT.경IPTG유도후,재표체숙주균중특이성적표체출분자량약위36 kDa차구유생물활성적OmpT단백.생장곡선시험현시,항균태LL37대대중조표체질립pET28a-OmpT적대장간균생장몰유영향,이대조조적생장명현수도항균태적억제작용.
