检验医学
檢驗醫學
검험의학
LABORATORY MEDICINE
2011年
12期
836-839
,共4页
肖艳群%张健%蒋玲丽%陈慧英%邵维杰%简敏华%陆银华
肖豔群%張健%蔣玲麗%陳慧英%邵維傑%簡敏華%陸銀華
초염군%장건%장령려%진혜영%소유걸%간민화%륙은화
α-烯醇化酶%抗内皮细胞抗体%酶联免疫吸附试验%自身免疫性疾病
α-烯醇化酶%抗內皮細胞抗體%酶聯免疫吸附試驗%自身免疫性疾病
α-희순화매%항내피세포항체%매련면역흡부시험%자신면역성질병
目的 建立与α-烯醇化酶(ENOI)相关的抗内皮细胞抗体(AECA)的酶联免疫吸附试验(ELISA),并探讨ENOI-AECA与自身免疫性疾病的关系.方法 人工合成获得人ENOI基因编码序列并克隆该片段构建pUC57-ENOI重组质粒,再将重组质粒亚克隆入原核表达载体pET28 (a),回收酶切产物并经T4DNA连接酶连接,获得的重组表达质粒pET28 (a) -ENOI,在大肠埃希菌BL21( DE3)中诱导表达蛋白,Ni NTA亲和层析纯化重组ENOI蛋白.以纯化的重组蛋白为包被抗原,并对ELISA反应条件进行优化,初步建立检测ENOI-AECAELISA并作分析性能评价.用建立的方法分别检测健康人及系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)患者血清中的ENOI-AECA.结果 获得了相对分子质量为47 000的高纯度人ENOI重组蛋白.ELISA抗原最佳包被浓度为5 μg/mL,血清最佳稀释倍数为1:50.以免疫印迹法为参照,所建方法的敏感性和特异性分别为76.0％和90.2％.SLE和RA患者血清中ENOI-AECA的阳性率分别为23.1％和57.1％；RA组ENOI-AECA阳性率与健康对照组比较,差异有统计学意义(P -0.000).结论 以人ENOI重组蛋白为抗原建立的检测ENOI-AECA的ELISA有较高的敏感性和特异性,可用于ENOI-AECA的检测.ENOI-AECA阳性提示患者可能患有自身免疫性血管炎.
目的 建立與α-烯醇化酶(ENOI)相關的抗內皮細胞抗體(AECA)的酶聯免疫吸附試驗(ELISA),併探討ENOI-AECA與自身免疫性疾病的關繫.方法 人工閤成穫得人ENOI基因編碼序列併剋隆該片段構建pUC57-ENOI重組質粒,再將重組質粒亞剋隆入原覈錶達載體pET28 (a),迴收酶切產物併經T4DNA連接酶連接,穫得的重組錶達質粒pET28 (a) -ENOI,在大腸埃希菌BL21( DE3)中誘導錶達蛋白,Ni NTA親和層析純化重組ENOI蛋白.以純化的重組蛋白為包被抗原,併對ELISA反應條件進行優化,初步建立檢測ENOI-AECAELISA併作分析性能評價.用建立的方法分彆檢測健康人及繫統性紅斑狼瘡(SLE)、類風濕性關節炎(RA)患者血清中的ENOI-AECA.結果 穫得瞭相對分子質量為47 000的高純度人ENOI重組蛋白.ELISA抗原最佳包被濃度為5 μg/mL,血清最佳稀釋倍數為1:50.以免疫印跡法為參照,所建方法的敏感性和特異性分彆為76.0％和90.2％.SLE和RA患者血清中ENOI-AECA的暘性率分彆為23.1％和57.1％；RA組ENOI-AECA暘性率與健康對照組比較,差異有統計學意義(P -0.000).結論 以人ENOI重組蛋白為抗原建立的檢測ENOI-AECA的ELISA有較高的敏感性和特異性,可用于ENOI-AECA的檢測.ENOI-AECA暘性提示患者可能患有自身免疫性血管炎.
목적 건립여α-희순화매(ENOI)상관적항내피세포항체(AECA)적매련면역흡부시험(ELISA),병탐토ENOI-AECA여자신면역성질병적관계.방법 인공합성획득인ENOI기인편마서렬병극륭해편단구건pUC57-ENOI중조질립,재장중조질립아극륭입원핵표체재체pET28 (a),회수매절산물병경T4DNA련접매련접,획득적중조표체질립pET28 (a) -ENOI,재대장애희균BL21( DE3)중유도표체단백,Ni NTA친화층석순화중조ENOI단백.이순화적중조단백위포피항원,병대ELISA반응조건진행우화,초보건립검측ENOI-AECAELISA병작분석성능평개.용건립적방법분별검측건강인급계통성홍반랑창(SLE)、류풍습성관절염(RA)환자혈청중적ENOI-AECA.결과 획득료상대분자질량위47 000적고순도인ENOI중조단백.ELISA항원최가포피농도위5 μg/mL,혈청최가희석배수위1:50.이면역인적법위삼조,소건방법적민감성화특이성분별위76.0％화90.2％.SLE화RA환자혈청중ENOI-AECA적양성솔분별위23.1％화57.1％；RA조ENOI-AECA양성솔여건강대조조비교,차이유통계학의의(P -0.000).결론 이인ENOI중조단백위항원건립적검측ENOI-AECA적ELISA유교고적민감성화특이성,가용우ENOI-AECA적검측.ENOI-AECA양성제시환자가능환유자신면역성혈관염.
