国际检验医学杂志
國際檢驗醫學雜誌
국제검험의학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2012年
8期
897-898,905
,共3页
胡小云%朱冰%王长兵%邝璐%肖密丝
鬍小雲%硃冰%王長兵%鄺璐%肖密絲
호소운%주빙%왕장병%광로%초밀사
肠道病毒71型%病毒纯化%超速离心
腸道病毒71型%病毒純化%超速離心
장도병독71형%병독순화%초속리심
目的 建立一种简单、快速有效的从细胞培养物中纯化肠道病毒71(EV71)的方法.方法 EV71病毒在恒河猴肾细胞(LLC-MK2)中增殖后,将获得的细胞培养物经反复冻融、聚乙二醇6000沉淀、超速离心、氯化铯垫层超速离心的方法纯化病毒.用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(Western blot)和透射电镜(TEM)的方法对纯化病毒进行鉴定,并测定其感染性的滴度及回收率.结果 SDS-PAGE显示出3个条带,相对分子质量分别为3.6×103、3×103和2.6×103与EV71的VP1、VP2和VP3相符合.Western blot证实为EV71特异性条带.经磷钨酸负染后电镜观察,能看到典型病毒颗粒.采用终浓度为10%的聚乙二醇6000沉淀后的病毒的感染性回收率为82.0%,再经氯化铯垫层超速离心后浓缩病毒的感染性回性率为29.0%.结论 聚乙二醇6000沉淀结合氯化铯垫层超速离心的方法比氯化铯密度梯度区带离心方法更简便,易于操作,并且比单独聚乙二醇6000沉淀有更高的纯度,是一种简便、有效的病毒纯化方法.
目的 建立一種簡單、快速有效的從細胞培養物中純化腸道病毒71(EV71)的方法.方法 EV71病毒在恆河猴腎細胞(LLC-MK2)中增殖後,將穫得的細胞培養物經反複凍融、聚乙二醇6000沉澱、超速離心、氯化銫墊層超速離心的方法純化病毒.用聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、免疫印跡(Western blot)和透射電鏡(TEM)的方法對純化病毒進行鑒定,併測定其感染性的滴度及迴收率.結果 SDS-PAGE顯示齣3箇條帶,相對分子質量分彆為3.6×103、3×103和2.6×103與EV71的VP1、VP2和VP3相符閤.Western blot證實為EV71特異性條帶.經燐鎢痠負染後電鏡觀察,能看到典型病毒顆粒.採用終濃度為10%的聚乙二醇6000沉澱後的病毒的感染性迴收率為82.0%,再經氯化銫墊層超速離心後濃縮病毒的感染性迴性率為29.0%.結論 聚乙二醇6000沉澱結閤氯化銫墊層超速離心的方法比氯化銫密度梯度區帶離心方法更簡便,易于操作,併且比單獨聚乙二醇6000沉澱有更高的純度,是一種簡便、有效的病毒純化方法.
목적 건립일충간단、쾌속유효적종세포배양물중순화장도병독71(EV71)적방법.방법 EV71병독재항하후신세포(LLC-MK2)중증식후,장획득적세포배양물경반복동융、취을이순6000침정、초속리심、록화색점층초속리심적방법순화병독.용취병희선알응효전영(SDS-PAGE)、면역인적(Western blot)화투사전경(TEM)적방법대순화병독진행감정,병측정기감염성적적도급회수솔.결과 SDS-PAGE현시출3개조대,상대분자질량분별위3.6×103、3×103화2.6×103여EV71적VP1、VP2화VP3상부합.Western blot증실위EV71특이성조대.경린오산부염후전경관찰,능간도전형병독과립.채용종농도위10%적취을이순6000침정후적병독적감염성회수솔위82.0%,재경록화색점층초속리심후농축병독적감염성회성솔위29.0%.결론 취을이순6000침정결합록화색점층초속리심적방법비록화색밀도제도구대리심방법경간편,역우조작,병차비단독취을이순6000침정유경고적순도,시일충간편、유효적병독순화방법.
