中华实验和临床病毒学杂志
中華實驗和臨床病毒學雜誌
중화실험화림상병독학잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL VIROLOGY
2005年
2期
162-164
,共3页
陈勇%余亚新%刘兴祥%魏来
陳勇%餘亞新%劉興祥%魏來
진용%여아신%류흥상%위래
肝炎病毒,乙型%拉米夫定%多态性,单核苷酸%SNaPshot技术
肝炎病毒,乙型%拉米伕定%多態性,單覈苷痠%SNaPshot技術
간염병독,을형%랍미부정%다태성,단핵감산%SNaPshot기술
目的建立SNaPshot技术对乙型肝炎病毒(HBV)基因组P基因区单核苷酸多态性(SNP)的分析.方法针对HBV YMDD变异位置的上、下游设计引物,用PCR方法进行DNA扩增,产物直接测序或克隆测序.再针对变异位点741A-G变异型(YVDD)和743G-T变异型(YIDD)的紧邻上游设计高度特异的SNaPshot检测引物,用不同荧光标记的ddNTP对PCR产物进行一步延伸,然后置于310型DNA测序仪上观察荧光信号,可直观的检测上述两位点的单核苷酸多态性.结果在拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者中,经测序证实P基因区不仅存在741、743位点的变异,还存在514C-A、523C-A、562T-A、667C-A等位点的变异.对已证实P基因区变异的13例患者血清用SNaPshot技术检测YMDD结果与测序结果完全相同,显示SNaPshot技术高度的特异性.结论SNaPshot技术检测HBV基因组SNPs具有快速、简便、准确特异的特点,还检测到野生株和变异株的混合存在.
目的建立SNaPshot技術對乙型肝炎病毒(HBV)基因組P基因區單覈苷痠多態性(SNP)的分析.方法針對HBV YMDD變異位置的上、下遊設計引物,用PCR方法進行DNA擴增,產物直接測序或剋隆測序.再針對變異位點741A-G變異型(YVDD)和743G-T變異型(YIDD)的緊鄰上遊設計高度特異的SNaPshot檢測引物,用不同熒光標記的ddNTP對PCR產物進行一步延伸,然後置于310型DNA測序儀上觀察熒光信號,可直觀的檢測上述兩位點的單覈苷痠多態性.結果在拉米伕定治療的慢性乙型肝炎患者中,經測序證實P基因區不僅存在741、743位點的變異,還存在514C-A、523C-A、562T-A、667C-A等位點的變異.對已證實P基因區變異的13例患者血清用SNaPshot技術檢測YMDD結果與測序結果完全相同,顯示SNaPshot技術高度的特異性.結論SNaPshot技術檢測HBV基因組SNPs具有快速、簡便、準確特異的特點,還檢測到野生株和變異株的混閤存在.
목적건립SNaPshot기술대을형간염병독(HBV)기인조P기인구단핵감산다태성(SNP)적분석.방법침대HBV YMDD변이위치적상、하유설계인물,용PCR방법진행DNA확증,산물직접측서혹극륭측서.재침대변이위점741A-G변이형(YVDD)화743G-T변이형(YIDD)적긴린상유설계고도특이적SNaPshot검측인물,용불동형광표기적ddNTP대PCR산물진행일보연신,연후치우310형DNA측서의상관찰형광신호,가직관적검측상술량위점적단핵감산다태성.결과재랍미부정치료적만성을형간염환자중,경측서증실P기인구불부존재741、743위점적변이,환존재514C-A、523C-A、562T-A、667C-A등위점적변이.대이증실P기인구변이적13례환자혈청용SNaPshot기술검측YMDD결과여측서결과완전상동,현시SNaPshot기술고도적특이성.결론SNaPshot기술검측HBV기인조SNPs구유쾌속、간편、준학특이적특점,환검측도야생주화변이주적혼합존재.
