中国动脉硬化杂志
中國動脈硬化雜誌
중국동맥경화잡지
CHINESE JOURNAL OF ARTERIOSCLEROSIS
2004年
3期
263-266
,共4页
冯宗承%胡新华%于彭%孙达欣%辛世杰%张强
馮宗承%鬍新華%于彭%孫達訢%辛世傑%張彊
풍종승%호신화%우팽%손체흔%신세걸%장강
分子生物学%肝细胞生长因子基因腺病毒重组体的构建%基因重组%基因表达,肝细胞生长因子%腺病毒载体%同源重组%血管平滑肌细胞%绿色荧光蛋白
分子生物學%肝細胞生長因子基因腺病毒重組體的構建%基因重組%基因錶達,肝細胞生長因子%腺病毒載體%同源重組%血管平滑肌細胞%綠色熒光蛋白
분자생물학%간세포생장인자기인선병독중조체적구건%기인중조%기인표체,간세포생장인자%선병독재체%동원중조%혈관평활기세포%록색형광단백
为探讨构建能表达肝细胞生长因子基因的腺病毒重组体的方法,以及这种腺病毒重组体能否在血管平滑肌细胞表达.将含有肝细胞生长因子基因片段的质粒用限制内切酶酶切,以琼脂糖凝胶电泳回收得到目的基因片段;将它用DNA连接酶插入至腺病毒穿梭质粒中,并用限制内切酶鉴别插入方向,得到插入方向正确的重组腺病毒穿梭质粒.用限制内切酶酶切重组腺病毒穿梭质粒和表达载体,使它们线性化;以电转化方法使它们共转化至BJ5183细胞中进行同源重组,构成肝细胞生长因子基因腺病毒重组体.以脂质体为转染介质,将肝细胞生长因子基因腺病毒重组体转染到人胚肾细胞中进行包装,使病毒复性具有感染能力.用包装后的肝细胞生长因子基因腺病毒重组体感染体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞;经逆转录-聚合酶链反应和蛋白印迹检测发现肝细胞生长因子呈现过表达.此外,酶切及测序发现重组腺病毒穿梭质粒和肝细胞生长因子基因腺病毒重组体是正确的;绿色荧光蛋白标记对重组体在人胚肾细胞中的包装及包装后感染大鼠主动脉平滑肌细胞进行了荧光示踪.结果提示,肝细胞生长因子基因腺病毒重组体构建成功,为血管疾病转基因治疗奠定了基础,具有一定临床价值.
為探討構建能錶達肝細胞生長因子基因的腺病毒重組體的方法,以及這種腺病毒重組體能否在血管平滑肌細胞錶達.將含有肝細胞生長因子基因片段的質粒用限製內切酶酶切,以瓊脂糖凝膠電泳迴收得到目的基因片段;將它用DNA連接酶插入至腺病毒穿梭質粒中,併用限製內切酶鑒彆插入方嚮,得到插入方嚮正確的重組腺病毒穿梭質粒.用限製內切酶酶切重組腺病毒穿梭質粒和錶達載體,使它們線性化;以電轉化方法使它們共轉化至BJ5183細胞中進行同源重組,構成肝細胞生長因子基因腺病毒重組體.以脂質體為轉染介質,將肝細胞生長因子基因腺病毒重組體轉染到人胚腎細胞中進行包裝,使病毒複性具有感染能力.用包裝後的肝細胞生長因子基因腺病毒重組體感染體外培養的大鼠主動脈平滑肌細胞;經逆轉錄-聚閤酶鏈反應和蛋白印跡檢測髮現肝細胞生長因子呈現過錶達.此外,酶切及測序髮現重組腺病毒穿梭質粒和肝細胞生長因子基因腺病毒重組體是正確的;綠色熒光蛋白標記對重組體在人胚腎細胞中的包裝及包裝後感染大鼠主動脈平滑肌細胞進行瞭熒光示蹤.結果提示,肝細胞生長因子基因腺病毒重組體構建成功,為血管疾病轉基因治療奠定瞭基礎,具有一定臨床價值.
위탐토구건능표체간세포생장인자기인적선병독중조체적방법,이급저충선병독중조체능부재혈관평활기세포표체.장함유간세포생장인자기인편단적질립용한제내절매매절,이경지당응효전영회수득도목적기인편단;장타용DNA련접매삽입지선병독천사질립중,병용한제내절매감별삽입방향,득도삽입방향정학적중조선병독천사질립.용한제내절매매절중조선병독천사질립화표체재체,사타문선성화;이전전화방법사타문공전화지BJ5183세포중진행동원중조,구성간세포생장인자기인선병독중조체.이지질체위전염개질,장간세포생장인자기인선병독중조체전염도인배신세포중진행포장,사병독복성구유감염능력.용포장후적간세포생장인자기인선병독중조체감염체외배양적대서주동맥평활기세포;경역전록-취합매련반응화단백인적검측발현간세포생장인자정현과표체.차외,매절급측서발현중조선병독천사질립화간세포생장인자기인선병독중조체시정학적;록색형광단백표기대중조체재인배신세포중적포장급포장후감염대서주동맥평활기세포진행료형광시종.결과제시,간세포생장인자기인선병독중조체구건성공,위혈관질병전기인치료전정료기출,구유일정림상개치.
