中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2005年
3期
250-252
,共3页
鸡致病性大肠杆菌%P型菌毛%TA克隆%测序%同源性
鷄緻病性大腸桿菌%P型菌毛%TA剋隆%測序%同源性
계치병성대장간균%P형균모%TA극륭%측서%동원성
用鸡致病性大肠杆菌分离株O1、O2和O78的基因组DNA做为模板,PCR分别扩增出了0.55kb的P型菌毛结构基因(papA).将扩增得到的3个papA基因片段分别克隆进pGEM-T(R)载体中,转化至受体菌JM109中,用Amp/IPTG/X-gal琼脂平板蓝白菌落筛选法,得到含阳性重组子的菌株,提取质粒后用BamH I和Sal I双酶切进行鉴定.所得阳性重组子进行DNA序列测定,测序结果经DNAStar核酸分析软件包分析比较,结果表明,所构建的克隆质粒中均含有相应完整papA基因,其开放式阅读框架大小为549 bp,编码182个氨基酸.此3株菌的P型菌毛结构基因的同源性为98.9%～100%,其中O1株和O78株的P型菌毛基因的ORF序列100%相同,O2株有2个碱基与前两者不同.
用鷄緻病性大腸桿菌分離株O1、O2和O78的基因組DNA做為模闆,PCR分彆擴增齣瞭0.55kb的P型菌毛結構基因(papA).將擴增得到的3箇papA基因片段分彆剋隆進pGEM-T(R)載體中,轉化至受體菌JM109中,用Amp/IPTG/X-gal瓊脂平闆藍白菌落篩選法,得到含暘性重組子的菌株,提取質粒後用BamH I和Sal I雙酶切進行鑒定.所得暘性重組子進行DNA序列測定,測序結果經DNAStar覈痠分析軟件包分析比較,結果錶明,所構建的剋隆質粒中均含有相應完整papA基因,其開放式閱讀框架大小為549 bp,編碼182箇氨基痠.此3株菌的P型菌毛結構基因的同源性為98.9%～100%,其中O1株和O78株的P型菌毛基因的ORF序列100%相同,O2株有2箇堿基與前兩者不同.
용계치병성대장간균분리주O1、O2화O78적기인조DNA주위모판,PCR분별확증출료0.55kb적P형균모결구기인(papA).장확증득도적3개papA기인편단분별극륭진pGEM-T(R)재체중,전화지수체균JM109중,용Amp/IPTG/X-gal경지평판람백균락사선법,득도함양성중조자적균주,제취질립후용BamH I화Sal I쌍매절진행감정.소득양성중조자진행DNA서렬측정,측서결과경DNAStar핵산분석연건포분석비교,결과표명,소구건적극륭질립중균함유상응완정papA기인,기개방식열독광가대소위549 bp,편마182개안기산.차3주균적P형균모결구기인적동원성위98.9%～100%,기중O1주화O78주적P형균모기인적ORF서렬100%상동,O2주유2개감기여전량자불동.
