自然科学进展
自然科學進展
자연과학진전
zirankexuejinzhan
2005年
10期
1256-1261
,共6页
闫若潜%李新生%杨天耀%夏春
閆若潛%李新生%楊天耀%夏春
염약잠%리신생%양천요%하춘
BF2%β2m%表达%二级结构%圆二色谱%同源模建
BF2%β2m%錶達%二級結構%圓二色譜%同源模建
BF2%β2m%표체%이급결구%원이색보%동원모건
为了推进鸡主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子(BF2,β2m)空间结构的研究,克隆、表达了鸡BF2和β2m基因,采用圆二色谱(CD)测定了其重组蛋白的二级结构,并同源模建了其三级结构.首先,将BF2和β2m基因分别插入原核表达载体进行了可溶性表达.对表达的融合蛋白进行纯化、蛋白酶切割并对切割后的蛋白进行分离和纯化,获得了麦芽糖结合蛋白(MBP)-BF2,β2m蛋白以及MBP单体.随后,测定了BF2和β2m的CD值.CD表明BF2蛋白呈典型的α螺旋;其中,α螺旋、β折叠、转角和随机蜷曲分别为72,102,70和90个氨基酸.β2m重组蛋白呈典型的β折叠,α螺旋、β折叠、转角和随机蜷曲分别为0,46,30和22个氨基酸.同源模建显示鸡BF2和β2m蛋白与人HLA-A2和小鼠H2的3D结构类似.结果显示了BF2和β2m蛋白在二维和三维上的分子特征及其与抗原多肽结合氨基酸的空间分布,为以后进一步构建鸡BF2-β2m复合物体外鉴定病毒抗原肽系统奠定了基础.
為瞭推進鷄主要組織相容性複閤體(MHC)Ⅰ類分子(BF2,β2m)空間結構的研究,剋隆、錶達瞭鷄BF2和β2m基因,採用圓二色譜(CD)測定瞭其重組蛋白的二級結構,併同源模建瞭其三級結構.首先,將BF2和β2m基因分彆插入原覈錶達載體進行瞭可溶性錶達.對錶達的融閤蛋白進行純化、蛋白酶切割併對切割後的蛋白進行分離和純化,穫得瞭麥芽糖結閤蛋白(MBP)-BF2,β2m蛋白以及MBP單體.隨後,測定瞭BF2和β2m的CD值.CD錶明BF2蛋白呈典型的α螺鏇;其中,α螺鏇、β摺疊、轉角和隨機踡麯分彆為72,102,70和90箇氨基痠.β2m重組蛋白呈典型的β摺疊,α螺鏇、β摺疊、轉角和隨機踡麯分彆為0,46,30和22箇氨基痠.同源模建顯示鷄BF2和β2m蛋白與人HLA-A2和小鼠H2的3D結構類似.結果顯示瞭BF2和β2m蛋白在二維和三維上的分子特徵及其與抗原多肽結閤氨基痠的空間分佈,為以後進一步構建鷄BF2-β2m複閤物體外鑒定病毒抗原肽繫統奠定瞭基礎.
위료추진계주요조직상용성복합체(MHC)Ⅰ류분자(BF2,β2m)공간결구적연구,극륭、표체료계BF2화β2m기인,채용원이색보(CD)측정료기중조단백적이급결구,병동원모건료기삼급결구.수선,장BF2화β2m기인분별삽입원핵표체재체진행료가용성표체.대표체적융합단백진행순화、단백매절할병대절할후적단백진행분리화순화,획득료맥아당결합단백(MBP)-BF2,β2m단백이급MBP단체.수후,측정료BF2화β2m적CD치.CD표명BF2단백정전형적α라선;기중,α라선、β절첩、전각화수궤권곡분별위72,102,70화90개안기산.β2m중조단백정전형적β절첩,α라선、β절첩、전각화수궤권곡분별위0,46,30화22개안기산.동원모건현시계BF2화β2m단백여인HLA-A2화소서H2적3D결구유사.결과현시료BF2화β2m단백재이유화삼유상적분자특정급기여항원다태결합안기산적공간분포,위이후진일보구건계BF2-β2m복합물체외감정병독항원태계통전정료기출.
