医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2006年
2期
123-128
,共6页
分化抑制因子%CD40%CD40配体%小鼠未成熟B淋巴瘤细胞%逆转录病毒
分化抑製因子%CD40%CD40配體%小鼠未成熟B淋巴瘤細胞%逆轉錄病毒
분화억제인자%CD40%CD40배체%소서미성숙B림파류세포%역전록병독
目的:研究CD40配体(CD40L)对小鼠未成熟B淋巴瘤细胞(WEHI-231细胞)分化抑制因子3(Id3)表达的影响.方法:用RT-PCR技术从WEHI-231细胞总RNA中扩增小鼠Id3(mId3)cDNA,将其亚克隆至p3FLAG-CMV-10载体;以p3FLAG-Id3-CMV-10为模板,用PCR扩增3FLAG-Id3融合基因,将其亚克隆至逆转录病毒载体pMX-CITE/IRES-EGFP中;通过脂质体转染技术将重组逆转录病毒载体(pMX-3FLAG-Id3-EGFP)转染Phoenix-ecotropic包装细胞系;将pMX-3FLAG-Id3-EGFP逆转录病毒转导WEHI-231细胞,转导48 h后的WEHI-231细胞与CD40L/NIH3T3和NIH3T3细胞共培养24～48 h.转导细胞经有限稀释法建立mld3基因稳定转染细胞系.mId3基因稳定转染细胞与CD40L/NIH3T3和NIH3T3细胞共培养24 h后,用Western blot法检测3FLAG-mId3融合蛋白的表达.结果:pMX-3FLAG-Id3-EGFP转导WEHI-231细胞后,EGFP阳性细胞比例随时间呈下降趋势;单独用培养液培养或与NIH3T3细胞共培养的pMX-3FLAG-Id3-EGFP/WEHI-231细胞,24～48 h后,EGFP阳性细胞率呈逐渐下降趋势;而与CD40L/NIH3T3细胞共培养的pMX-3FLAG-Id3-EGFP/WEHI 231细胞,EGFP阳性细胞率基本保持不变.稳定表达3FLAG-Id3融合蛋白的WEHI-231细胞与CD40L/NIH3T3和NIH3T3细胞共培养24 h后,Western blot结果显示,CD40L刺激可明显抑制3FLAG-Id3-EGFP/WEHI-231中Id3的表达.结论:CD0L可能通过对Id3的降解而缓解Id3诱导的细胞生长抑制作用.
目的:研究CD40配體(CD40L)對小鼠未成熟B淋巴瘤細胞(WEHI-231細胞)分化抑製因子3(Id3)錶達的影響.方法:用RT-PCR技術從WEHI-231細胞總RNA中擴增小鼠Id3(mId3)cDNA,將其亞剋隆至p3FLAG-CMV-10載體;以p3FLAG-Id3-CMV-10為模闆,用PCR擴增3FLAG-Id3融閤基因,將其亞剋隆至逆轉錄病毒載體pMX-CITE/IRES-EGFP中;通過脂質體轉染技術將重組逆轉錄病毒載體(pMX-3FLAG-Id3-EGFP)轉染Phoenix-ecotropic包裝細胞繫;將pMX-3FLAG-Id3-EGFP逆轉錄病毒轉導WEHI-231細胞,轉導48 h後的WEHI-231細胞與CD40L/NIH3T3和NIH3T3細胞共培養24～48 h.轉導細胞經有限稀釋法建立mld3基因穩定轉染細胞繫.mId3基因穩定轉染細胞與CD40L/NIH3T3和NIH3T3細胞共培養24 h後,用Western blot法檢測3FLAG-mId3融閤蛋白的錶達.結果:pMX-3FLAG-Id3-EGFP轉導WEHI-231細胞後,EGFP暘性細胞比例隨時間呈下降趨勢;單獨用培養液培養或與NIH3T3細胞共培養的pMX-3FLAG-Id3-EGFP/WEHI-231細胞,24～48 h後,EGFP暘性細胞率呈逐漸下降趨勢;而與CD40L/NIH3T3細胞共培養的pMX-3FLAG-Id3-EGFP/WEHI 231細胞,EGFP暘性細胞率基本保持不變.穩定錶達3FLAG-Id3融閤蛋白的WEHI-231細胞與CD40L/NIH3T3和NIH3T3細胞共培養24 h後,Western blot結果顯示,CD40L刺激可明顯抑製3FLAG-Id3-EGFP/WEHI-231中Id3的錶達.結論:CD0L可能通過對Id3的降解而緩解Id3誘導的細胞生長抑製作用.
목적:연구CD40배체(CD40L)대소서미성숙B림파류세포(WEHI-231세포)분화억제인자3(Id3)표체적영향.방법:용RT-PCR기술종WEHI-231세포총RNA중확증소서Id3(mId3)cDNA,장기아극륭지p3FLAG-CMV-10재체;이p3FLAG-Id3-CMV-10위모판,용PCR확증3FLAG-Id3융합기인,장기아극륭지역전록병독재체pMX-CITE/IRES-EGFP중;통과지질체전염기술장중조역전록병독재체(pMX-3FLAG-Id3-EGFP)전염Phoenix-ecotropic포장세포계;장pMX-3FLAG-Id3-EGFP역전록병독전도WEHI-231세포,전도48 h후적WEHI-231세포여CD40L/NIH3T3화NIH3T3세포공배양24～48 h.전도세포경유한희석법건립mld3기인은정전염세포계.mId3기인은정전염세포여CD40L/NIH3T3화NIH3T3세포공배양24 h후,용Western blot법검측3FLAG-mId3융합단백적표체.결과:pMX-3FLAG-Id3-EGFP전도WEHI-231세포후,EGFP양성세포비례수시간정하강추세;단독용배양액배양혹여NIH3T3세포공배양적pMX-3FLAG-Id3-EGFP/WEHI-231세포,24～48 h후,EGFP양성세포솔정축점하강추세;이여CD40L/NIH3T3세포공배양적pMX-3FLAG-Id3-EGFP/WEHI 231세포,EGFP양성세포솔기본보지불변.은정표체3FLAG-Id3융합단백적WEHI-231세포여CD40L/NIH3T3화NIH3T3세포공배양24 h후,Western blot결과현시,CD40L자격가명현억제3FLAG-Id3-EGFP/WEHI-231중Id3적표체.결론:CD0L가능통과대Id3적강해이완해Id3유도적세포생장억제작용.
