CAJ | 학술논문

此研究的目的是体外表达HIV-1逆转录酶P66亚单位蛋白,并得到纯度较高且具有活性的重组蛋白.首先通过PCR方法从含HIV-1 HXB2标准株全基因的质粒中扩增出全长p66基因,插入表达载体pTWIN1,构建pTWIN-p66质粒.再将该质粒转化到表达菌BL21,在IPTG诱导下表达P66蛋白.表达产物经几丁质柱一步纯化后得到P66蛋白纯品.纯化的P66蛋白分别催化B95-8细胞总RNA、RT试剂盒中对照RNA进行逆转录;同时以试剂盒中的M-MLV RT为对照进行相同的逆转录,PCR后电泳比较活性.结果显示我们构建的pTWIN-p66质粒在IPTG诱导下在原核细胞中P66亚单位蛋白表达量较高,经一步纯化后蛋白凝胶扫描纯度达88%,并具有较好的逆转录活性.与M-MLV RT体外活性比较,两者活性相当.该研究为进一步开发国产HIV确证诊断试剂及抗AIDS药物的研究打下了初步基础.
차연구적목적시체외표체HIV-1역전록매P66아단위단백,병득도순도교고차구유활성적중조단백.수선통과PCR방법종함HIV-1 HXB2표준주전기인적질립중확증출전장p66기인,삽입표체재체pTWIN1,구건pTWIN-p66질립.재장해질립전화도표체균BL21,재IPTG유도하표체P66단백.표체산물경궤정질주일보순화후득도P66단백순품.순화적P66단백분별최화B95-8세포총RNA、RT시제합중대조RNA진행역전록;동시이시제합중적M-MLV RT위대조진행상동적역전록,PCR후전영비교활성.결과현시아문구건적pTWIN-p66질립재IPTG유도하재원핵세포중P66아단위단백표체량교고,경일보순화후단백응효소묘순도체88%,병구유교호적역전록활성.여M-MLV RT체외활성비교,량자활성상당.해연구위진일보개발국산HIV학증진단시제급항AIDS약물적연구타하료초보기출.