中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2008年
2期
53-58
,共6页
滕文静%胡新玲%王伟%程克棣%邱德有
滕文靜%鬍新玲%王偉%程剋棣%邱德有
등문정%호신령%왕위%정극체%구덕유
紫杉烷13α-羟基化酶%全长cDNA%烟草%转化
紫杉烷13α-羥基化酶%全長cDNA%煙草%轉化
자삼완13α-간기화매%전장cDNA%연초%전화
利用东北红豆杉(Taxus cuspidata)cDNA文库作为模版,通过PCR技术扩增得到我国东北红豆杉紫杉烷13α-羟基化酶(Taxane 13α-hydroxylase,简称13OH)的全长cDNA,将PCR产物克隆到pGM-T载体后测序结果表明该序列长度为1458bp.同源性比较分析结果表明:其碱基序列与已经报道的东北红豆杉(Taxus cuspidata)的13OH基因的一致性为99.38%,其氨基酸序列同与已经报道的东北红豆杉的13OH氨基酸序列的一致性为99.18%.将获得的cDNA全长序列正向插入到含有GUS报告基因的pCambia1305.1后成功地构建出东北红豆杉13OH植物表达载体pC13OH,通过电击法把pC13OH转入根癌农杆菌GV3101中.利用该工程菌株对普通烟草进行了转化,在潮霉素选择压力下获得了完整的再生植株.利用13OH基因特异引物,通过PCR技术筛选到4株阳性再生植株.在这4株再生植株中,有3株植株GUS报告基因的组织化学染色呈现阳性反应,表明该植物载体表达载体中与13OH相融合的GUS基因成功地得到了表达.为今后深入研究13OH基因在烟草中的表达和开展紫杉烷13α-羟基化酶基因对红豆杉细胞的转化以及研究作用于该基因的小RNA调节子打下了基础.
利用東北紅豆杉(Taxus cuspidata)cDNA文庫作為模版,通過PCR技術擴增得到我國東北紅豆杉紫杉烷13α-羥基化酶(Taxane 13α-hydroxylase,簡稱13OH)的全長cDNA,將PCR產物剋隆到pGM-T載體後測序結果錶明該序列長度為1458bp.同源性比較分析結果錶明:其堿基序列與已經報道的東北紅豆杉(Taxus cuspidata)的13OH基因的一緻性為99.38%,其氨基痠序列同與已經報道的東北紅豆杉的13OH氨基痠序列的一緻性為99.18%.將穫得的cDNA全長序列正嚮插入到含有GUS報告基因的pCambia1305.1後成功地構建齣東北紅豆杉13OH植物錶達載體pC13OH,通過電擊法把pC13OH轉入根癌農桿菌GV3101中.利用該工程菌株對普通煙草進行瞭轉化,在潮黴素選擇壓力下穫得瞭完整的再生植株.利用13OH基因特異引物,通過PCR技術篩選到4株暘性再生植株.在這4株再生植株中,有3株植株GUS報告基因的組織化學染色呈現暘性反應,錶明該植物載體錶達載體中與13OH相融閤的GUS基因成功地得到瞭錶達.為今後深入研究13OH基因在煙草中的錶達和開展紫杉烷13α-羥基化酶基因對紅豆杉細胞的轉化以及研究作用于該基因的小RNA調節子打下瞭基礎.
이용동북홍두삼(Taxus cuspidata)cDNA문고작위모판,통과PCR기술확증득도아국동북홍두삼자삼완13α-간기화매(Taxane 13α-hydroxylase,간칭13OH)적전장cDNA,장PCR산물극륭도pGM-T재체후측서결과표명해서렬장도위1458bp.동원성비교분석결과표명:기감기서렬여이경보도적동북홍두삼(Taxus cuspidata)적13OH기인적일치성위99.38%,기안기산서렬동여이경보도적동북홍두삼적13OH안기산서렬적일치성위99.18%.장획득적cDNA전장서렬정향삽입도함유GUS보고기인적pCambia1305.1후성공지구건출동북홍두삼13OH식물표체재체pC13OH,통과전격법파pC13OH전입근암농간균GV3101중.이용해공정균주대보통연초진행료전화,재조매소선택압력하획득료완정적재생식주.이용13OH기인특이인물,통과PCR기술사선도4주양성재생식주.재저4주재생식주중,유3주식주GUS보고기인적조직화학염색정현양성반응,표명해식물재체표체재체중여13OH상융합적GUS기인성공지득도료표체.위금후심입연구13OH기인재연초중적표체화개전자삼완13α-간기화매기인대홍두삼세포적전화이급연구작용우해기인적소RNA조절자타하료기출.
