第二军医大学学报
第二軍醫大學學報
제이군의대학학보
ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2008年
10期
1230-1233
,共4页
李刚%金钢%周旭宇%胡先贵%王军%李铁军
李剛%金鋼%週旭宇%鬍先貴%王軍%李鐵軍
리강%금강%주욱우%호선귀%왕군%리철군
SLOOP基因%慢病毒%胰腺肿瘤%绿色荧光蛋白
SLOOP基因%慢病毒%胰腺腫瘤%綠色熒光蛋白
SLOOP기인%만병독%이선종류%록색형광단백
目的:构建胰腺癌新基因SLOOP与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因慢病毒载体.方法:实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增获得SlOOP的全外显子片段.使之克隆到带GFP荧光报告基因慢病毒表达载体质粒中,慢病毒包装质粒和穿棱质粒共转染293T细胞,包装成功后收集上清,浓缩,鉴定.取浓缩纯化后的病毒上清感染293T细胞和宿主胰腺癌细胞.荧光显微镜观察293T细胞的荧光表达,RT-PCR鉴定胰腺癌细胞中SLOOP的表达水平.结果:电泳鉴定结果与目的基因表达条带完全吻合,克隆测序结果与NCBI收录的S LOOP基因序列完全一致.重组慢病毒质粒可高效转染293T细胞.荧光显微镜下可观察到大量绿色荧光.共转染后293T细胞上清可高效感染293T细胞,感染后宿主细胞中S LOOP高表达.结论:成功构建了S LOOP与GFP融合基因慢病毒表达载体,为进一步研究SLOOP基因的相关功能提供了适合的稳定转染载体.
目的:構建胰腺癌新基因SLOOP與綠色熒光蛋白(GFP)融閤基因慢病毒載體.方法:實時定量聚閤酶鏈反應(RT-PCR)方法擴增穫得SlOOP的全外顯子片段.使之剋隆到帶GFP熒光報告基因慢病毒錶達載體質粒中,慢病毒包裝質粒和穿稜質粒共轉染293T細胞,包裝成功後收集上清,濃縮,鑒定.取濃縮純化後的病毒上清感染293T細胞和宿主胰腺癌細胞.熒光顯微鏡觀察293T細胞的熒光錶達,RT-PCR鑒定胰腺癌細胞中SLOOP的錶達水平.結果:電泳鑒定結果與目的基因錶達條帶完全吻閤,剋隆測序結果與NCBI收錄的S LOOP基因序列完全一緻.重組慢病毒質粒可高效轉染293T細胞.熒光顯微鏡下可觀察到大量綠色熒光.共轉染後293T細胞上清可高效感染293T細胞,感染後宿主細胞中S LOOP高錶達.結論:成功構建瞭S LOOP與GFP融閤基因慢病毒錶達載體,為進一步研究SLOOP基因的相關功能提供瞭適閤的穩定轉染載體.
목적:구건이선암신기인SLOOP여록색형광단백(GFP)융합기인만병독재체.방법:실시정량취합매련반응(RT-PCR)방법확증획득SlOOP적전외현자편단.사지극륭도대GFP형광보고기인만병독표체재체질립중,만병독포장질립화천릉질립공전염293T세포,포장성공후수집상청,농축,감정.취농축순화후적병독상청감염293T세포화숙주이선암세포.형광현미경관찰293T세포적형광표체,RT-PCR감정이선암세포중SLOOP적표체수평.결과:전영감정결과여목적기인표체조대완전문합,극륭측서결과여NCBI수록적S LOOP기인서렬완전일치.중조만병독질립가고효전염293T세포.형광현미경하가관찰도대량록색형광.공전염후293T세포상청가고효감염293T세포,감염후숙주세포중S LOOP고표체.결론:성공구건료S LOOP여GFP융합기인만병독표체재체,위진일보연구SLOOP기인적상관공능제공료괄합적은정전염재체.
