中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
9期
741-745
,共5页
胡薇%郝军元%张惠英%艾永兴
鬍薇%郝軍元%張惠英%艾永興
호미%학군원%장혜영%애영흥
人端粒酶催化亚单位核心启动子%胸苷激酶%逆转录病毒%肿瘤%细胞凋亡
人耑粒酶催化亞單位覈心啟動子%胸苷激酶%逆轉錄病毒%腫瘤%細胞凋亡
인단립매최화아단위핵심계동자%흉감격매%역전록병독%종류%세포조망
目的 观察人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子调控逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)自杀基因系统诱导肿瘤细胞凋亡的效果.方法 采用PCR方法扩增胸苷激酶(TK)基因,并构建由hTERT核心启动子调控的胸苷激酶重组逆转录病毒载体pLNC-hTERTp-TK,转染包装细胞PT67,G418筛选阳性细胞克隆,检测病毒滴度,PCR法检测转染细胞中的TK基因.将获得的重组逆转录病毒感染人肺癌细胞株A549、肝癌细胞株SMMC-7721、宫颈癌细胞株HeLa和正常人成纤维细胞系WI-38,C418筛选阳性克隆,MTT法检测重组逆转录病毒对肿瘤细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡.结果 重组逆转录病毒载体pLNC-hTERTp-TK经双酶切,可见1402 bp的目的 基因片段,表明质粒构建正确.从转染的PT67细胞中扩增出1131 bp的基因片段,与TK基因大小一致.在成功转染重组逆转录病毒的PT67细胞中,病毒滴度最高者可达7.8×105 CFU/ml.重组逆转录病毒感染的3种肿瘤细胞的增殖均受到抑制,且生长抑制率随着GCV浓度的增加而升高,经较低浓度GCV(10μg/ml)处理的3种肿瘤细胞,凋亡率分别可达37.06%、34.88%和33.59%.结论 由hTERT启动子调控的逆转录病毒介导的HSV-TK/GCV自杀基因系统可诱导肿瘤细胞凋亡,且具有较强的特异性和高效性.
目的 觀察人耑粒酶催化亞單位(hTERT)啟動子調控逆轉錄病毒介導的單純皰疹病毒-胸苷激酶基因/丙氧鳥苷(HSV-TK/GCV)自殺基因繫統誘導腫瘤細胞凋亡的效果.方法 採用PCR方法擴增胸苷激酶(TK)基因,併構建由hTERT覈心啟動子調控的胸苷激酶重組逆轉錄病毒載體pLNC-hTERTp-TK,轉染包裝細胞PT67,G418篩選暘性細胞剋隆,檢測病毒滴度,PCR法檢測轉染細胞中的TK基因.將穫得的重組逆轉錄病毒感染人肺癌細胞株A549、肝癌細胞株SMMC-7721、宮頸癌細胞株HeLa和正常人成纖維細胞繫WI-38,C418篩選暘性剋隆,MTT法檢測重組逆轉錄病毒對腫瘤細胞的生長抑製作用,流式細胞儀檢測腫瘤細胞的凋亡.結果 重組逆轉錄病毒載體pLNC-hTERTp-TK經雙酶切,可見1402 bp的目的 基因片段,錶明質粒構建正確.從轉染的PT67細胞中擴增齣1131 bp的基因片段,與TK基因大小一緻.在成功轉染重組逆轉錄病毒的PT67細胞中,病毒滴度最高者可達7.8×105 CFU/ml.重組逆轉錄病毒感染的3種腫瘤細胞的增殖均受到抑製,且生長抑製率隨著GCV濃度的增加而升高,經較低濃度GCV(10μg/ml)處理的3種腫瘤細胞,凋亡率分彆可達37.06%、34.88%和33.59%.結論 由hTERT啟動子調控的逆轉錄病毒介導的HSV-TK/GCV自殺基因繫統可誘導腫瘤細胞凋亡,且具有較彊的特異性和高效性.
목적 관찰인단립매최화아단위(hTERT)계동자조공역전록병독개도적단순포진병독-흉감격매기인/병양조감(HSV-TK/GCV)자살기인계통유도종류세포조망적효과.방법 채용PCR방법확증흉감격매(TK)기인,병구건유hTERT핵심계동자조공적흉감격매중조역전록병독재체pLNC-hTERTp-TK,전염포장세포PT67,G418사선양성세포극륭,검측병독적도,PCR법검측전염세포중적TK기인.장획득적중조역전록병독감염인폐암세포주A549、간암세포주SMMC-7721、궁경암세포주HeLa화정상인성섬유세포계WI-38,C418사선양성극륭,MTT법검측중조역전록병독대종류세포적생장억제작용,류식세포의검측종류세포적조망.결과 중조역전록병독재체pLNC-hTERTp-TK경쌍매절,가견1402 bp적목적 기인편단,표명질립구건정학.종전염적PT67세포중확증출1131 bp적기인편단,여TK기인대소일치.재성공전염중조역전록병독적PT67세포중,병독적도최고자가체7.8×105 CFU/ml.중조역전록병독감염적3충종류세포적증식균수도억제,차생장억제솔수착GCV농도적증가이승고,경교저농도GCV(10μg/ml)처리적3충종류세포,조망솔분별가체37.06%、34.88%화33.59%.결론 유hTERT계동자조공적역전록병독개도적HSV-TK/GCV자살기인계통가유도종류세포조망,차구유교강적특이성화고효성.
