重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2009年
2期
168-173
,共6页
人端粒酶逆转录酶%survivin基因%启动区(遗传学)%肺癌%基因疗法
人耑粒酶逆轉錄酶%survivin基因%啟動區(遺傳學)%肺癌%基因療法
인단립매역전록매%survivin기인%계동구(유전학)%폐암%기인요법
目的:比较不同长度的hTERT启动子以及Survivin启动子在肺癌A549细胞中的启动活性,为肺癌靶向性基因治疗提供依据.方法:用PCR法扩增1084 bp hTERT启动子、980 bp Survivin启动子和红色荧光蛋白基凶;在真核表达质粒pGL3-hTERT基础上分别构建3种启动子调控的、以红色荧光蛋白CDS为目的基因的真核表达质粒pGL-H-RED、pGL-LH-RED和pGL-S-RED.将重组质粒用脂质体分别转染A549和MRC-5细胞,72h后用Imagepro-Plus6.0分析3种启动子在相同时间内启动红色荧光蛋白的表达水平.结果:重组质粒在A549细胞中观察到了红色荧光,在MRC-5细胞中无红色荧光.pGL-S-RED质粒在A549细胞巾表达最强,pGL-LH-RED次之,pGL-H-RED最弱,3种质粒在A549细胞中的荧光强度(IOD)分别为201.17、171.70和136.34.结论:所克隆的hTERT启动子和Survivin启动子均表现出肿瘤特异性,其中Survivin启动子在肺癌A549细胞中具有最好的启动效应,可望开发成为肺癌靶向性基因治疗工具.
目的:比較不同長度的hTERT啟動子以及Survivin啟動子在肺癌A549細胞中的啟動活性,為肺癌靶嚮性基因治療提供依據.方法:用PCR法擴增1084 bp hTERT啟動子、980 bp Survivin啟動子和紅色熒光蛋白基兇;在真覈錶達質粒pGL3-hTERT基礎上分彆構建3種啟動子調控的、以紅色熒光蛋白CDS為目的基因的真覈錶達質粒pGL-H-RED、pGL-LH-RED和pGL-S-RED.將重組質粒用脂質體分彆轉染A549和MRC-5細胞,72h後用Imagepro-Plus6.0分析3種啟動子在相同時間內啟動紅色熒光蛋白的錶達水平.結果:重組質粒在A549細胞中觀察到瞭紅色熒光,在MRC-5細胞中無紅色熒光.pGL-S-RED質粒在A549細胞巾錶達最彊,pGL-LH-RED次之,pGL-H-RED最弱,3種質粒在A549細胞中的熒光彊度(IOD)分彆為201.17、171.70和136.34.結論:所剋隆的hTERT啟動子和Survivin啟動子均錶現齣腫瘤特異性,其中Survivin啟動子在肺癌A549細胞中具有最好的啟動效應,可望開髮成為肺癌靶嚮性基因治療工具.
목적:비교불동장도적hTERT계동자이급Survivin계동자재폐암A549세포중적계동활성,위폐암파향성기인치료제공의거.방법:용PCR법확증1084 bp hTERT계동자、980 bp Survivin계동자화홍색형광단백기흉;재진핵표체질립pGL3-hTERT기출상분별구건3충계동자조공적、이홍색형광단백CDS위목적기인적진핵표체질립pGL-H-RED、pGL-LH-RED화pGL-S-RED.장중조질립용지질체분별전염A549화MRC-5세포,72h후용Imagepro-Plus6.0분석3충계동자재상동시간내계동홍색형광단백적표체수평.결과:중조질립재A549세포중관찰도료홍색형광,재MRC-5세포중무홍색형광.pGL-S-RED질립재A549세포건표체최강,pGL-LH-RED차지,pGL-H-RED최약,3충질립재A549세포중적형광강도(IOD)분별위201.17、171.70화136.34.결론:소극륭적hTERT계동자화Survivin계동자균표현출종류특이성,기중Survivin계동자재폐암A549세포중구유최호적계동효응,가망개발성위폐암파향성기인치료공구.
