临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
臨床耳鼻嚥喉頭頸外科雜誌
림상이비인후두경외과잡지
JOURNAL OF CLINICAL OTORHINOLARYNGOLOGY HEAD AND NECK SURGERY
2011年
10期
463-468
,共6页
李隽%孔维佳%赵学艳%杨阳%胡钰娟
李雋%孔維佳%趙學豔%楊暘%鬍鈺娟
리준%공유가%조학염%양양%호옥연
血管纹%缘细胞%重组2型腺相关病毒%锰超氧化物歧化酶%氧化应激
血管紋%緣細胞%重組2型腺相關病毒%錳超氧化物歧化酶%氧化應激
혈관문%연세포%중조2형선상관병독%맹초양화물기화매%양화응격
目的:探讨以重组2型腺相关病毒(AAV2)介导锰超氧化物歧化酶(MnSOD)高表达对耳蜗血管纹缘细胞氧化损伤的作用及机制.方法:体外培养耳蜗血管纹缘细胞(MCs),分为实验组、对照组及正常组.实验组按感染复数(MOI)为104v·g/cell感染rAAV2- MnSOD-EGFP,同时感染rAAV2-EGFP作对照组及不作处理缘细胞为正常组.荧光显微镜下观察MCs绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况及免疫印迹法(western blot)分析转染后MnSOD的表达水平.实验组及对照组同时暴露于400 μmol/L H2O2 2 h,24 h后比色法测定各组丙二醛(MDA )含量;流式细胞PI荧光标记检测细胞凋亡率;Western blot 检测凋亡因子Caspase-3活化片段Cleaved caspase-3的表达.结果:①各组MCs感染病毒后,生长正常,实验组感染rAAV2- MnSOD-EGFP后4d出现EGFP的表达,10 d至高峰;且持续细胞体外生长的整个周期.实验组MnSOD的表达及活性明显高与对照组及正常组,差异有统计学意义(P<0.05).②经H2O2作用后实验组MDA、Caspase-3活化片段Cleaved caspase-3的表达及凋亡率明显低与对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:rAAV2-MnSOD-EGFP能有效地转染体外培养的MCs使其高表达MnSOD,并对MCs氧化损伤有保护作用,这种保护作用与抑制凋亡因子Caspase-3的活化有关.
目的:探討以重組2型腺相關病毒(AAV2)介導錳超氧化物歧化酶(MnSOD)高錶達對耳蝸血管紋緣細胞氧化損傷的作用及機製.方法:體外培養耳蝸血管紋緣細胞(MCs),分為實驗組、對照組及正常組.實驗組按感染複數(MOI)為104v·g/cell感染rAAV2- MnSOD-EGFP,同時感染rAAV2-EGFP作對照組及不作處理緣細胞為正常組.熒光顯微鏡下觀察MCs綠色熒光蛋白(EGFP)的錶達情況及免疫印跡法(western blot)分析轉染後MnSOD的錶達水平.實驗組及對照組同時暴露于400 μmol/L H2O2 2 h,24 h後比色法測定各組丙二醛(MDA )含量;流式細胞PI熒光標記檢測細胞凋亡率;Western blot 檢測凋亡因子Caspase-3活化片段Cleaved caspase-3的錶達.結果:①各組MCs感染病毒後,生長正常,實驗組感染rAAV2- MnSOD-EGFP後4d齣現EGFP的錶達,10 d至高峰;且持續細胞體外生長的整箇週期.實驗組MnSOD的錶達及活性明顯高與對照組及正常組,差異有統計學意義(P<0.05).②經H2O2作用後實驗組MDA、Caspase-3活化片段Cleaved caspase-3的錶達及凋亡率明顯低與對照組,差異有統計學意義(P<0.05).結論:rAAV2-MnSOD-EGFP能有效地轉染體外培養的MCs使其高錶達MnSOD,併對MCs氧化損傷有保護作用,這種保護作用與抑製凋亡因子Caspase-3的活化有關.
목적:탐토이중조2형선상관병독(AAV2)개도맹초양화물기화매(MnSOD)고표체대이와혈관문연세포양화손상적작용급궤제.방법:체외배양이와혈관문연세포(MCs),분위실험조、대조조급정상조.실험조안감염복수(MOI)위104v·g/cell감염rAAV2- MnSOD-EGFP,동시감염rAAV2-EGFP작대조조급불작처리연세포위정상조.형광현미경하관찰MCs록색형광단백(EGFP)적표체정황급면역인적법(western blot)분석전염후MnSOD적표체수평.실험조급대조조동시폭로우400 μmol/L H2O2 2 h,24 h후비색법측정각조병이철(MDA )함량;류식세포PI형광표기검측세포조망솔;Western blot 검측조망인자Caspase-3활화편단Cleaved caspase-3적표체.결과:①각조MCs감염병독후,생장정상,실험조감염rAAV2- MnSOD-EGFP후4d출현EGFP적표체,10 d지고봉;차지속세포체외생장적정개주기.실험조MnSOD적표체급활성명현고여대조조급정상조,차이유통계학의의(P<0.05).②경H2O2작용후실험조MDA、Caspase-3활화편단Cleaved caspase-3적표체급조망솔명현저여대조조,차이유통계학의의(P<0.05).결론:rAAV2-MnSOD-EGFP능유효지전염체외배양적MCs사기고표체MnSOD,병대MCs양화손상유보호작용,저충보호작용여억제조망인자Caspase-3적활화유관.
