中国组织工程研究
中國組織工程研究
중국조직공정연구
Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research
2012年
24期
4381-4386
,共6页
邹沙沙%陈婷婷%张玲玲%田汝辉%杨施%李铮%胡洪亮
鄒沙沙%陳婷婷%張玲玲%田汝輝%楊施%李錚%鬍洪亮
추사사%진정정%장령령%전여휘%양시%리쟁%호홍량
骨发育%Ihh%反转录病毒%C3H10T1/2%成骨
骨髮育%Ihh%反轉錄病毒%C3H10T1/2%成骨
골발육%Ihh%반전록병독%C3H10T1/2%성골
背景:目前大量研究证实Indian hedgehog(Ihh)信号通路在骨发育中发挥着重要的调控作用.目的:克隆Ihh重组反转录病毒载体,观察Ihh在C3H10T1/2细胞中的表达及其成骨诱导效果.方法:采用分子克隆技术将Ihh基因与增强型绿色荧光蛋白基因克隆到反转录病毒载体pSFG上,包装出假病毒转染C3H10T1/2细胞,在共聚焦显微镜下观察其绿色荧光蛋白强度及转染效率.运用Western blot方法检测Ihh蛋白的表达,观察C3H10T1/2细胞形态学变化,碱性磷酸酶染色检测成骨活性.结果与结论:共聚焦显微镜下观察到大量的绿色荧光表达,Western blot检测结果显示Ihh基因及增强型绿色荧光蛋白基因在C3H10T1/2中呈显著共表达.在体外培养过程中,Ihh能诱导C3H10T1/2细胞形态学发生改变,增加碱性磷酸酶活性,提示Ihh具有诱导C3H10T1/2细胞向骨细胞分化的潜能.
揹景:目前大量研究證實Indian hedgehog(Ihh)信號通路在骨髮育中髮揮著重要的調控作用.目的:剋隆Ihh重組反轉錄病毒載體,觀察Ihh在C3H10T1/2細胞中的錶達及其成骨誘導效果.方法:採用分子剋隆技術將Ihh基因與增彊型綠色熒光蛋白基因剋隆到反轉錄病毒載體pSFG上,包裝齣假病毒轉染C3H10T1/2細胞,在共聚焦顯微鏡下觀察其綠色熒光蛋白彊度及轉染效率.運用Western blot方法檢測Ihh蛋白的錶達,觀察C3H10T1/2細胞形態學變化,堿性燐痠酶染色檢測成骨活性.結果與結論:共聚焦顯微鏡下觀察到大量的綠色熒光錶達,Western blot檢測結果顯示Ihh基因及增彊型綠色熒光蛋白基因在C3H10T1/2中呈顯著共錶達.在體外培養過程中,Ihh能誘導C3H10T1/2細胞形態學髮生改變,增加堿性燐痠酶活性,提示Ihh具有誘導C3H10T1/2細胞嚮骨細胞分化的潛能.
배경:목전대량연구증실Indian hedgehog(Ihh)신호통로재골발육중발휘착중요적조공작용.목적:극륭Ihh중조반전록병독재체,관찰Ihh재C3H10T1/2세포중적표체급기성골유도효과.방법:채용분자극륭기술장Ihh기인여증강형록색형광단백기인극륭도반전록병독재체pSFG상,포장출가병독전염C3H10T1/2세포,재공취초현미경하관찰기록색형광단백강도급전염효솔.운용Western blot방법검측Ihh단백적표체,관찰C3H10T1/2세포형태학변화,감성린산매염색검측성골활성.결과여결론:공취초현미경하관찰도대량적록색형광표체,Western blot검측결과현시Ihh기인급증강형록색형광단백기인재C3H10T1/2중정현저공표체.재체외배양과정중,Ihh능유도C3H10T1/2세포형태학발생개변,증가감성린산매활성,제시Ihh구유유도C3H10T1/2세포향골세포분화적잠능.
