神经解剖学杂志
神經解剖學雜誌
신경해부학잡지
CHINESE JOURNAL OF NEUROANATOMY
2004年
6期
543-547
,共5页
左皓%谢佐平%孙朝晖%李鹏%赖燕来
左皓%謝佐平%孫朝暉%李鵬%賴燕來
좌호%사좌평%손조휘%리붕%뢰연래
脑源性神经营养因子%原核表达%星形胶质细胞%多巴胺神经元
腦源性神經營養因子%原覈錶達%星形膠質細胞%多巴胺神經元
뇌원성신경영양인자%원핵표체%성형효질세포%다파알신경원
为了研究脑源性神经营养因子在大肠杆菌中的表达及其在治疗Parkinson病中的作用,采用RT-PCR技术,从人胚脑组织扩增及克隆了BDNF全长及其成熟蛋白编码基因,经测序证实后,将其分别克隆至表达载体pcDNA3.1与pGEX6p-1,构建了重组真核表达载体pcDNA3.1-BDNF和重组原核表达载体pGEX6p-BDNFs.pcDNA3.1-BDNF经脂质体介导转染至体外培养的E16胚鼠中脑星形胶质细胞,以G418筛选出抗性阳性克隆,该克隆株与E12-E14胚鼠中脑神经干细胞体外共培养,酪氨酸羟化酶免疫细胞化学反应显示,转染细胞株所表达的BDNF蛋白具有生物学活性,可延长前体细胞的存活并促进其向多巴胺神经元分化.将pGEX6p-BDNFs转化大肠杆菌,以IPTG诱导,获得了相对分子质量约为40 kD的GST-BDNF融合蛋白,其表达量约占菌体总蛋白的10%,并经免疫印迹证实具有特异的免疫反应性.
為瞭研究腦源性神經營養因子在大腸桿菌中的錶達及其在治療Parkinson病中的作用,採用RT-PCR技術,從人胚腦組織擴增及剋隆瞭BDNF全長及其成熟蛋白編碼基因,經測序證實後,將其分彆剋隆至錶達載體pcDNA3.1與pGEX6p-1,構建瞭重組真覈錶達載體pcDNA3.1-BDNF和重組原覈錶達載體pGEX6p-BDNFs.pcDNA3.1-BDNF經脂質體介導轉染至體外培養的E16胚鼠中腦星形膠質細胞,以G418篩選齣抗性暘性剋隆,該剋隆株與E12-E14胚鼠中腦神經榦細胞體外共培養,酪氨痠羥化酶免疫細胞化學反應顯示,轉染細胞株所錶達的BDNF蛋白具有生物學活性,可延長前體細胞的存活併促進其嚮多巴胺神經元分化.將pGEX6p-BDNFs轉化大腸桿菌,以IPTG誘導,穫得瞭相對分子質量約為40 kD的GST-BDNF融閤蛋白,其錶達量約佔菌體總蛋白的10%,併經免疫印跡證實具有特異的免疫反應性.
위료연구뇌원성신경영양인자재대장간균중적표체급기재치료Parkinson병중적작용,채용RT-PCR기술,종인배뇌조직확증급극륭료BDNF전장급기성숙단백편마기인,경측서증실후,장기분별극륭지표체재체pcDNA3.1여pGEX6p-1,구건료중조진핵표체재체pcDNA3.1-BDNF화중조원핵표체재체pGEX6p-BDNFs.pcDNA3.1-BDNF경지질체개도전염지체외배양적E16배서중뇌성형효질세포,이G418사선출항성양성극륭,해극륭주여E12-E14배서중뇌신경간세포체외공배양,락안산간화매면역세포화학반응현시,전염세포주소표체적BDNF단백구유생물학활성,가연장전체세포적존활병촉진기향다파알신경원분화.장pGEX6p-BDNFs전화대장간균,이IPTG유도,획득료상대분자질량약위40 kD적GST-BDNF융합단백,기표체량약점균체총단백적10%,병경면역인적증실구유특이적면역반응성.
