中国药理学通报
中國藥理學通報
중국약이학통보
CHINESE PHARMACOLOGICAL BULLETIN
2006年
10期
1266-1271
,共6页
陈仁海%吕燕慧%胡琼莹%裴钢%陈力
陳仁海%呂燕慧%鬍瓊瑩%裴鋼%陳力
진인해%려연혜%호경형%배강%진력
趋化因子受体CCR5%亲和闪烁法%[35S]GTPγS结合实验方法%高通量筛选
趨化因子受體CCR5%親和閃爍法%[35S]GTPγS結閤實驗方法%高通量篩選
추화인자수체CCR5%친화섬삭법%[35S]GTPγS결합실험방법%고통량사선
目的 建立针对趋化因子受体CCR5的药物筛选SPAWGA法[35S]GTPγS结合实验方法.方法 通过降低SPAWGA小球用量和对其他各种因素进行优化,如细胞膜用量、GDP浓度、体系孵育时间和样品连续测量时间,建立了SPAWGA法[35S]GTPyS结合实验方法.结果 最后优化得到实验条件为:100μl反应体系,0.1 mg SPA-WGA小球,10μgCHO-CCR5细胞膜,10μmol·L-1 GDP和0.3 nmol·L-1[35S]GTPγS,室温孵育1.5 h并且在1 200 min之内完成所有样品测量.该法与传统抽滤法比较,测量得到RANTES的EC50分别为:1.40 nmo1·L-1和2.90 nmol·L-1,测量得到SCH-C的IC50分别为:2.95 nmol·L-1和2.73 nmol·L-1,测量结果相似,均呈现出较好的剂量效应关系.利用该法筛选54个化合物,筛到3个IC50在1～10 nmol·L-1的化合物.这3个化合物是否具有HIV-1进入抑制剂的潜在开发价值,还有待体外抗HIV-1实验的进一步验证和筛选.结论 此方法操作简便,灵敏性和重现性好,且可高通量和自动化,该法适用于能与Gi家族蛋白偶联的GPCR的高通量药物筛选.
目的 建立針對趨化因子受體CCR5的藥物篩選SPAWGA法[35S]GTPγS結閤實驗方法.方法 通過降低SPAWGA小毬用量和對其他各種因素進行優化,如細胞膜用量、GDP濃度、體繫孵育時間和樣品連續測量時間,建立瞭SPAWGA法[35S]GTPyS結閤實驗方法.結果 最後優化得到實驗條件為:100μl反應體繫,0.1 mg SPA-WGA小毬,10μgCHO-CCR5細胞膜,10μmol·L-1 GDP和0.3 nmol·L-1[35S]GTPγS,室溫孵育1.5 h併且在1 200 min之內完成所有樣品測量.該法與傳統抽濾法比較,測量得到RANTES的EC50分彆為:1.40 nmo1·L-1和2.90 nmol·L-1,測量得到SCH-C的IC50分彆為:2.95 nmol·L-1和2.73 nmol·L-1,測量結果相似,均呈現齣較好的劑量效應關繫.利用該法篩選54箇化閤物,篩到3箇IC50在1～10 nmol·L-1的化閤物.這3箇化閤物是否具有HIV-1進入抑製劑的潛在開髮價值,還有待體外抗HIV-1實驗的進一步驗證和篩選.結論 此方法操作簡便,靈敏性和重現性好,且可高通量和自動化,該法適用于能與Gi傢族蛋白偶聯的GPCR的高通量藥物篩選.
목적 건립침대추화인자수체CCR5적약물사선SPAWGA법[35S]GTPγS결합실험방법.방법 통과강저SPAWGA소구용량화대기타각충인소진행우화,여세포막용량、GDP농도、체계부육시간화양품련속측량시간,건립료SPAWGA법[35S]GTPyS결합실험방법.결과 최후우화득도실험조건위:100μl반응체계,0.1 mg SPA-WGA소구,10μgCHO-CCR5세포막,10μmol·L-1 GDP화0.3 nmol·L-1[35S]GTPγS,실온부육1.5 h병차재1 200 min지내완성소유양품측량.해법여전통추려법비교,측량득도RANTES적EC50분별위:1.40 nmo1·L-1화2.90 nmol·L-1,측량득도SCH-C적IC50분별위:2.95 nmol·L-1화2.73 nmol·L-1,측량결과상사,균정현출교호적제량효응관계.이용해법사선54개화합물,사도3개IC50재1～10 nmol·L-1적화합물.저3개화합물시부구유HIV-1진입억제제적잠재개발개치,환유대체외항HIV-1실험적진일보험증화사선.결론 차방법조작간편,령민성화중현성호,차가고통량화자동화,해법괄용우능여Gi가족단백우련적GPCR적고통량약물사선.
