中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2008年
7期
563-568
,共6页
胡秋炅%徐志文%郭万柱%朱玲%蒋清蓉%王印%王小玉
鬍鞦炅%徐誌文%郭萬柱%硃玲%蔣清蓉%王印%王小玉
호추경%서지문%곽만주%주령%장청용%왕인%왕소옥
猪细小病毒%VP2基因%定点突变%真核表达
豬細小病毒%VP2基因%定點突變%真覈錶達
저세소병독%VP2기인%정점돌변%진핵표체
根据GenBank中的猪细小病毒(PPV)VP2基因序列设计并合成了2对突变引物,对PPV SC-1株VP2基因进行了定点突变.利用重叠延伸PCR技术分别将VP2蛋白中第402位(A)和214位(B)的半胱氨酸突变为精氨酸,并定向克隆入真核表达载体pPI-2.EGFP中,构建含报告基因EGFP的重组质粒pPI-2.EGFP.VP2(A)、pPI-2.EGFP.VP2(B);利用脂质体介导法将上述重组质粒转染COS-7细胞,从而研究该突变对VP2基因表达的影响.结果显示,成功构建了合突变体及EGFP的真核表达载体;在倒置荧光显微镜下,突变后的质粒转染呈现不同的荧光信号,A样品的荧光呈颗粒状分布于细胞中,而B样品与阳性对照相似,荧光信号均匀分布于细胞中.提示,突变的引入是导致表达差异的主要原因.
根據GenBank中的豬細小病毒(PPV)VP2基因序列設計併閤成瞭2對突變引物,對PPV SC-1株VP2基因進行瞭定點突變.利用重疊延伸PCR技術分彆將VP2蛋白中第402位(A)和214位(B)的半胱氨痠突變為精氨痠,併定嚮剋隆入真覈錶達載體pPI-2.EGFP中,構建含報告基因EGFP的重組質粒pPI-2.EGFP.VP2(A)、pPI-2.EGFP.VP2(B);利用脂質體介導法將上述重組質粒轉染COS-7細胞,從而研究該突變對VP2基因錶達的影響.結果顯示,成功構建瞭閤突變體及EGFP的真覈錶達載體;在倒置熒光顯微鏡下,突變後的質粒轉染呈現不同的熒光信號,A樣品的熒光呈顆粒狀分佈于細胞中,而B樣品與暘性對照相似,熒光信號均勻分佈于細胞中.提示,突變的引入是導緻錶達差異的主要原因.
근거GenBank중적저세소병독(PPV)VP2기인서렬설계병합성료2대돌변인물,대PPV SC-1주VP2기인진행료정점돌변.이용중첩연신PCR기술분별장VP2단백중제402위(A)화214위(B)적반광안산돌변위정안산,병정향극륭입진핵표체재체pPI-2.EGFP중,구건함보고기인EGFP적중조질립pPI-2.EGFP.VP2(A)、pPI-2.EGFP.VP2(B);이용지질체개도법장상술중조질립전염COS-7세포,종이연구해돌변대VP2기인표체적영향.결과현시,성공구건료합돌변체급EGFP적진핵표체재체;재도치형광현미경하,돌변후적질립전염정현불동적형광신호,A양품적형광정과립상분포우세포중,이B양품여양성대조상사,형광신호균균분포우세포중.제시,돌변적인입시도치표체차이적주요원인.
