四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2007年
3期
382-385
,共4页
佘华宁%孙乃学%郑玉萍%权彦龙%曹振平%王肖华
佘華寧%孫迺學%鄭玉萍%權彥龍%曹振平%王肖華
사화저%손내학%정옥평%권언룡%조진평%왕초화
神经短肽%NAP%视网膜神经上皮细胞%细胞培养%兔
神經短肽%NAP%視網膜神經上皮細胞%細胞培養%兔
신경단태%NAP%시망막신경상피세포%세포배양%토
目的 以感染神经营养因子4-神经保护短肽融合基因(NT4-NAP)的兔虹膜色素上皮细胞(IPECs)为替代分泌细胞,探讨NAP对兔视网膜神经上皮细胞生长的作用.方法 分别培养兔IPECs和视网膜神经上皮细胞;构建NT4-NAP融合基因,同时构建重组腺相关病毒载体rAAV-GFP和rAAV-NAP(含融合基因NT4-NAP),采用斑点杂交法测定病毒滴度.rAAV-GFP感染体外培养的兔IPECs,以荧光表达检测病毒的感染情况.rAAV-NAP感染兔IPECs 3d后收集含NAP蛋白的上清液,将其加入兔视网膜神经上皮细胞的培养基中,观察细胞的生长状况,同时以未加上清液的兔视网膜神经上皮细胞为对照.结果 经斑点杂交证实rAAV-GFP滴度为2.25×1011 cfu/mL,rAAV-NAP滴度为2.25×1010 cfu/mL.感染rAAV-GFP的兔IPECs表达出明显的绿色荧光.在加入含有NAP蛋白上清液的培养基中,兔视网膜神经上皮细胞生长良好,存活细胞数目多,细胞突起粗而长,培养14d时其突起长度[(14.6±1.1) μm]与对照组[(3.1±0.6) μm]相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 神经短肽NAP对体外培养的兔视网膜神经上皮细胞有促进生长的作用.
目的 以感染神經營養因子4-神經保護短肽融閤基因(NT4-NAP)的兔虹膜色素上皮細胞(IPECs)為替代分泌細胞,探討NAP對兔視網膜神經上皮細胞生長的作用.方法 分彆培養兔IPECs和視網膜神經上皮細胞;構建NT4-NAP融閤基因,同時構建重組腺相關病毒載體rAAV-GFP和rAAV-NAP(含融閤基因NT4-NAP),採用斑點雜交法測定病毒滴度.rAAV-GFP感染體外培養的兔IPECs,以熒光錶達檢測病毒的感染情況.rAAV-NAP感染兔IPECs 3d後收集含NAP蛋白的上清液,將其加入兔視網膜神經上皮細胞的培養基中,觀察細胞的生長狀況,同時以未加上清液的兔視網膜神經上皮細胞為對照.結果 經斑點雜交證實rAAV-GFP滴度為2.25×1011 cfu/mL,rAAV-NAP滴度為2.25×1010 cfu/mL.感染rAAV-GFP的兔IPECs錶達齣明顯的綠色熒光.在加入含有NAP蛋白上清液的培養基中,兔視網膜神經上皮細胞生長良好,存活細胞數目多,細胞突起粗而長,培養14d時其突起長度[(14.6±1.1) μm]與對照組[(3.1±0.6) μm]相比差異有統計學意義(P＜0.05).結論 神經短肽NAP對體外培養的兔視網膜神經上皮細胞有促進生長的作用.
목적 이감염신경영양인자4-신경보호단태융합기인(NT4-NAP)적토홍막색소상피세포(IPECs)위체대분비세포,탐토NAP대토시망막신경상피세포생장적작용.방법 분별배양토IPECs화시망막신경상피세포;구건NT4-NAP융합기인,동시구건중조선상관병독재체rAAV-GFP화rAAV-NAP(함융합기인NT4-NAP),채용반점잡교법측정병독적도.rAAV-GFP감염체외배양적토IPECs,이형광표체검측병독적감염정황.rAAV-NAP감염토IPECs 3d후수집함NAP단백적상청액,장기가입토시망막신경상피세포적배양기중,관찰세포적생장상황,동시이미가상청액적토시망막신경상피세포위대조.결과 경반점잡교증실rAAV-GFP적도위2.25×1011 cfu/mL,rAAV-NAP적도위2.25×1010 cfu/mL.감염rAAV-GFP적토IPECs표체출명현적록색형광.재가입함유NAP단백상청액적배양기중,토시망막신경상피세포생장량호,존활세포수목다,세포돌기조이장,배양14d시기돌기장도[(14.6±1.1) μm]여대조조[(3.1±0.6) μm]상비차이유통계학의의(P＜0.05).결론 신경단태NAP대체외배양적토시망막신경상피세포유촉진생장적작용.
