河南农业大学学报
河南農業大學學報
하남농업대학학보
ACTA AGRICULTURAE UNIVERSITATIS HENANENSIS
2007年
5期
545-549
,共5页
尹新明%安世恒%江志伟%胡鹏
尹新明%安世恆%江誌偉%鬍鵬
윤신명%안세항%강지위%호붕
家蚕%核型多角体病毒%ORF 75基因%克隆%表达
傢蠶%覈型多角體病毒%ORF 75基因%剋隆%錶達
가잠%핵형다각체병독%ORF 75기인%극륭%표체
根据GenBank发表的序列(L 33180)设计引物,利用PCR技术扩增了编码家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus,BmNPV)ORF 75基因的DNA片段,将其连接至pMD18-T载体上,获得了该基因成熟蛋白阅读框序列.利用设计的酶切位点将目的基因从克隆载体上切下.表达质粒pGEX-4T-2经BamHI/XhoI双酶切,与目的片断连接,得到重组表达质粒pGEX/Bm75.将重组表达质粒pGEX/Bm75转化入大肠杆菌BL 21中,经IPTG诱导表达后,12% SDS-PAGE分析表明产生57 kDa左右的特异蛋白质条带.对表达产物进行Western blotting分析,结果表明,pGEX/Bm75经IPTG诱导产生的57 kDa蛋白条带与抗体发生了很强的交叉反应,融合蛋白得到了表达.
根據GenBank髮錶的序列(L 33180)設計引物,利用PCR技術擴增瞭編碼傢蠶覈型多角體病毒(Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus,BmNPV)ORF 75基因的DNA片段,將其連接至pMD18-T載體上,穫得瞭該基因成熟蛋白閱讀框序列.利用設計的酶切位點將目的基因從剋隆載體上切下.錶達質粒pGEX-4T-2經BamHI/XhoI雙酶切,與目的片斷連接,得到重組錶達質粒pGEX/Bm75.將重組錶達質粒pGEX/Bm75轉化入大腸桿菌BL 21中,經IPTG誘導錶達後,12% SDS-PAGE分析錶明產生57 kDa左右的特異蛋白質條帶.對錶達產物進行Western blotting分析,結果錶明,pGEX/Bm75經IPTG誘導產生的57 kDa蛋白條帶與抗體髮生瞭很彊的交扠反應,融閤蛋白得到瞭錶達.
근거GenBank발표적서렬(L 33180)설계인물,이용PCR기술확증료편마가잠핵형다각체병독(Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus,BmNPV)ORF 75기인적DNA편단,장기련접지pMD18-T재체상,획득료해기인성숙단백열독광서렬.이용설계적매절위점장목적기인종극륭재체상절하.표체질립pGEX-4T-2경BamHI/XhoI쌍매절,여목적편단련접,득도중조표체질립pGEX/Bm75.장중조표체질립pGEX/Bm75전화입대장간균BL 21중,경IPTG유도표체후,12% SDS-PAGE분석표명산생57 kDa좌우적특이단백질조대.대표체산물진행Western blotting분석,결과표명,pGEX/Bm75경IPTG유도산생적57 kDa단백조대여항체발생료흔강적교차반응,융합단백득도료표체.
