北方园艺
北方園藝
북방완예
NORTHERN HORTICULTURE
2010年
16期
125-128
,共4页
邱利娜%廖明安%李明章%王丽华%郑晓琴
邱利娜%廖明安%李明章%王麗華%鄭曉琴
구리나%료명안%리명장%왕려화%정효금
'红阳'猕猴桃%正交设计%ISSR%反应体系
'紅暘'獼猴桃%正交設計%ISSR%反應體繫
'홍양'미후도%정교설계%ISSR%반응체계
以'红阳'猕猴桃及其杂交F1代为试材,通过正交设计对ISSR-PCR扩增反应的影响因子进行优化,初步确立了适合'红阳'猕猴桃ISSR-PCR反应体系:总体积20 μL,10×PCR buffer 2.0 μL,Mg2+ 0.75 mmol/L, Taq酶1.5 U,模板DNA 60 ng,引物1.25 μmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L.扩增程序:94℃预变性7 min,94℃变性30 s,50～58℃退火45 s,72℃延伸2 min,45个循环,72℃延伸7 min.引物UBC841的最佳退火温度为58.5℃.应用该优化反应体系,用UBC835对35份杂交F1代DNA进行ISSR-PCR扩增,结果显示优化后的反应体系具有较高的稳定性.
以'紅暘'獼猴桃及其雜交F1代為試材,通過正交設計對ISSR-PCR擴增反應的影響因子進行優化,初步確立瞭適閤'紅暘'獼猴桃ISSR-PCR反應體繫:總體積20 μL,10×PCR buffer 2.0 μL,Mg2+ 0.75 mmol/L, Taq酶1.5 U,模闆DNA 60 ng,引物1.25 μmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L.擴增程序:94℃預變性7 min,94℃變性30 s,50～58℃退火45 s,72℃延伸2 min,45箇循環,72℃延伸7 min.引物UBC841的最佳退火溫度為58.5℃.應用該優化反應體繫,用UBC835對35份雜交F1代DNA進行ISSR-PCR擴增,結果顯示優化後的反應體繫具有較高的穩定性.
이'홍양'미후도급기잡교F1대위시재,통과정교설계대ISSR-PCR확증반응적영향인자진행우화,초보학립료괄합'홍양'미후도ISSR-PCR반응체계:총체적20 μL,10×PCR buffer 2.0 μL,Mg2+ 0.75 mmol/L, Taq매1.5 U,모판DNA 60 ng,인물1.25 μmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L.확증정서:94℃예변성7 min,94℃변성30 s,50～58℃퇴화45 s,72℃연신2 min,45개순배,72℃연신7 min.인물UBC841적최가퇴화온도위58.5℃.응용해우화반응체계,용UBC835대35빈잡교F1대DNA진행ISSR-PCR확증,결과현시우화후적반응체계구유교고적은정성.
