食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2010年
19期
263-267
,共5页
裂殖壶菌%鲨烯合酶%cDNA 克隆%原核表达
裂殖壺菌%鯊烯閤酶%cDNA 剋隆%原覈錶達
렬식호균%사희합매%cDNA 극륭%원핵표체
为探讨裂殖壶菌烯合酶基因的克隆,以及在大肠杆菌中的表达.采用简并引物与RACE相结合的方法从裂殖壶菌(Schizochytrium limacinum)中克降出鲨烯合酶基因.分析表明该基因的cDNA全长包括1672个核苷酸,编码一个含446个氨基酸的开放阅读框;在裂殖壶菌中以单拷贝的形式存在.同源分析显示裂殖壶菌鲨烯合酶的氨基酸序列中含有5个保守基序.将裂殖壶菌鲨烯合酶的cDNA序列连接到原核表达载体pGEX-4T-3上构建融合表达载体,并在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE及Western blotting分析结果显示,诱导表达出的融合蛋白主要以包涵体的形式存在,其相对分子质量与预期相符;且融合蛋白具有一定的免疫原性.
為探討裂殖壺菌烯閤酶基因的剋隆,以及在大腸桿菌中的錶達.採用簡併引物與RACE相結閤的方法從裂殖壺菌(Schizochytrium limacinum)中剋降齣鯊烯閤酶基因.分析錶明該基因的cDNA全長包括1672箇覈苷痠,編碼一箇含446箇氨基痠的開放閱讀框;在裂殖壺菌中以單拷貝的形式存在.同源分析顯示裂殖壺菌鯊烯閤酶的氨基痠序列中含有5箇保守基序.將裂殖壺菌鯊烯閤酶的cDNA序列連接到原覈錶達載體pGEX-4T-3上構建融閤錶達載體,併在大腸桿菌BL21中進行IPTG誘導錶達,SDS-PAGE及Western blotting分析結果顯示,誘導錶達齣的融閤蛋白主要以包涵體的形式存在,其相對分子質量與預期相符;且融閤蛋白具有一定的免疫原性.
위탐토렬식호균희합매기인적극륭,이급재대장간균중적표체.채용간병인물여RACE상결합적방법종렬식호균(Schizochytrium limacinum)중극강출사희합매기인.분석표명해기인적cDNA전장포괄1672개핵감산,편마일개함446개안기산적개방열독광;재렬식호균중이단고패적형식존재.동원분석현시렬식호균사희합매적안기산서렬중함유5개보수기서.장렬식호균사희합매적cDNA서렬련접도원핵표체재체pGEX-4T-3상구건융합표체재체,병재대장간균BL21중진행IPTG유도표체,SDS-PAGE급Western blotting분석결과현시,유도표체출적융합단백주요이포함체적형식존재,기상대분자질량여예기상부;차융합단백구유일정적면역원성.
