生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2011年
4期
458-462
,共5页
郑道山%冯冲%朱彦宾%龙川%冯书堂%潘登科%马文丽
鄭道山%馮遲%硃彥賓%龍川%馮書堂%潘登科%馬文麗
정도산%풍충%주언빈%룡천%풍서당%반등과%마문려
五指山小型猪%基因敲除%GGTA1基因%胎儿成纤维细胞
五指山小型豬%基因敲除%GGTA1基因%胎兒成纖維細胞
오지산소형저%기인고제%GGTA1기인%태인성섬유세포
目的:获得α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因R除的五指山小型猪胎儿,为异种器官移植研究提供基础平台.方法:以新霉素磷酸转移酶基因(neo)为筛选标记基因构建启动子缺陷型打靶载体,打靶载体线性化后用电转染法将其导入胎儿成纤维细胞中,转染后的细胞经G418筛选后,用PCR法检测药物抗性的细胞克隆,对阳性细胞进行核移植构建重构胚胎及胚胎移植.结果:转染后,经筛选共得到176个具有G418抗性的细胞克隆,经PCR检测,其中2个细胞克隆发生了同源重组;以其中1个GGTA1+/-细胞克隆为供体细胞进行核移植,将重构胚移植到2头自然发情的受体母猪中,1头受体妊娠;第37d将代孕母猪处死,获得2个胎儿,经PCR和Southern印迹鉴定,均为GGTA1单等位基因敲除胎儿.结论:构建了五指山小型猪GGTA1基因部分外显子4区域敲除的启动子缺陷型打靶载体,获得了GGTA1单等位基因敲除的胎儿,为培育GGTA1基因敲除的五指山小型猪奠定了基础.
目的:穫得α-1,3-半乳糖基轉移酶(GGTA1)基因R除的五指山小型豬胎兒,為異種器官移植研究提供基礎平檯.方法:以新黴素燐痠轉移酶基因(neo)為篩選標記基因構建啟動子缺陷型打靶載體,打靶載體線性化後用電轉染法將其導入胎兒成纖維細胞中,轉染後的細胞經G418篩選後,用PCR法檢測藥物抗性的細胞剋隆,對暘性細胞進行覈移植構建重構胚胎及胚胎移植.結果:轉染後,經篩選共得到176箇具有G418抗性的細胞剋隆,經PCR檢測,其中2箇細胞剋隆髮生瞭同源重組;以其中1箇GGTA1+/-細胞剋隆為供體細胞進行覈移植,將重構胚移植到2頭自然髮情的受體母豬中,1頭受體妊娠;第37d將代孕母豬處死,穫得2箇胎兒,經PCR和Southern印跡鑒定,均為GGTA1單等位基因敲除胎兒.結論:構建瞭五指山小型豬GGTA1基因部分外顯子4區域敲除的啟動子缺陷型打靶載體,穫得瞭GGTA1單等位基因敲除的胎兒,為培育GGTA1基因敲除的五指山小型豬奠定瞭基礎.
목적:획득α-1,3-반유당기전이매(GGTA1)기인R제적오지산소형저태인,위이충기관이식연구제공기출평태.방법:이신매소린산전이매기인(neo)위사선표기기인구건계동자결함형타파재체,타파재체선성화후용전전염법장기도입태인성섬유세포중,전염후적세포경G418사선후,용PCR법검측약물항성적세포극륭,대양성세포진행핵이식구건중구배태급배태이식.결과:전염후,경사선공득도176개구유G418항성적세포극륭,경PCR검측,기중2개세포극륭발생료동원중조;이기중1개GGTA1+/-세포극륭위공체세포진행핵이식,장중구배이식도2두자연발정적수체모저중,1두수체임신;제37d장대잉모저처사,획득2개태인,경PCR화Southern인적감정,균위GGTA1단등위기인고제태인.결론:구건료오지산소형저GGTA1기인부분외현자4구역고제적계동자결함형타파재체,획득료GGTA1단등위기인고제적태인,위배육GGTA1기인고제적오지산소형저전정료기출.
