CAJ | 학술논문

目的:首次探讨尼古丁对穿孔素/颗粒酶B(perforin/granzyme B)诱导的A549肺癌细胞凋亡的抑制作用及其机制.方法:以人肺癌细胞株A549为研究对象,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染荧光显微镜下观察细胞凋亡形态学变化,异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)染色后流式细胞术定量检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)及存活素(survivin)mRNA的表达量.结果:(1)不同浓度尼古丁单独作用A549细胞时未见明显诱导凋亡现象,可显著抑制细胞生长(P< 0.01),其抑制率与作用时间和剂量呈正相关.(2)0.125 mg/L perforin作用于A549细胞(1×106个)时,PI染核率可达到90%以上.而当加入1 μL granzyme B(1 mg/L)孵育6 h时,perforin/granzyme B组细胞可呈现90%以上的凋亡现象.(3)6 μmol/L尼古丁作用于perforin/granzyme B预处理的细胞6 h时可见明显凋亡抑制现象,当检测其凋亡抑制蛋白XIAP和survivin mRNA的含量时,发现尼古丁组表达量较高,perforin/granzyme B组表达量明显降低,而当尼古丁联合perforin/granzyme B时表达量最高.结论:尼古丁可明显抑制perforin/granzyme B诱导的A549肺癌细胞凋亡现象,这种作用可能与凋亡抑制蛋白XIAP和survivin的表达上调有关.
목적:수차탐토니고정대천공소/과립매B(perforin/granzyme B)유도적A549폐암세포조망적억제작용급기궤제.방법:이인폐암세포주A549위연구대상,채용사갑기우담새서람(MTT)비색법검측세포활성,아정등/추화을정(AO/EB)쌍염형광현미경하관찰세포조망형태학변화,이류청산형광소표기적막련단백V/전화병정(Annexin V-FITC/PI)염색후류식세포술정량검측세포조망솔,RT-PCR법검측X련쇄조망억제단백(XIAP)급존활소(survivin)mRNA적표체량.결과:(1)불동농도니고정단독작용A549세포시미견명현유도조망현상,가현저억제세포생장(P< 0.01),기억제솔여작용시간화제량정정상관.(2)0.125 mg/L perforin작용우A549세포(1×106개)시,PI염핵솔가체도90%이상.이당가입1 μL granzyme B(1 mg/L)부육6 h시,perforin/granzyme B조세포가정현90%이상적조망현상.(3)6 μmol/L니고정작용우perforin/granzyme B예처리적세포6 h시가견명현조망억제현상,당검측기조망억제단백XIAP화survivin mRNA적함량시,발현니고정조표체량교고,perforin/granzyme B조표체량명현강저,이당니고정연합perforin/granzyme B시표체량최고.결론:니고정가명현억제perforin/granzyme B유도적A549폐암세포조망현상,저충작용가능여조망억제단백XIAP화survivin적표체상조유관.