广东农业科学
廣東農業科學
엄동농업과학
GUANGDONG AGRICULTURAL SCIENCES
2011年
6期
1-5
,共5页
吴明皇%常藕琴%石存斌%吴淑勤
吳明皇%常藕琴%石存斌%吳淑勤
오명황%상우금%석존빈%오숙근
鳜鱼:TCRα基因%实时荧光定量PCR
鱖魚:TCRα基因%實時熒光定量PCR
궐어:TCRα기인%실시형광정량PCR
根据GeneBank上鳜鱼TCRα基因序列设计并合成特异性引物,以鳜鱼β-actin基因为内参,采用RT-PCR方法从鳜鱼的胸腺总RNA中扩增得到鳜鱼TCRα和β-ctin基因,将目的片段纯化后克隆到PMD 18-T载体上,测序鉴定.以阳性质粒为标准品,采用SYBR GreenⅡ染料法进行实时荧光定量PCR扩增,构建标准曲线并进行溶解曲线分析.结果表明,鳜鱼TCRα基因的Ct值与标准品稀释度在102～108拷贝/μL范围呈良好的线性关系,产达0.99以上,溶解曲线分析表明产物为特异的单峰.
根據GeneBank上鱖魚TCRα基因序列設計併閤成特異性引物,以鱖魚β-actin基因為內參,採用RT-PCR方法從鱖魚的胸腺總RNA中擴增得到鱖魚TCRα和β-ctin基因,將目的片段純化後剋隆到PMD 18-T載體上,測序鑒定.以暘性質粒為標準品,採用SYBR GreenⅡ染料法進行實時熒光定量PCR擴增,構建標準麯線併進行溶解麯線分析.結果錶明,鱖魚TCRα基因的Ct值與標準品稀釋度在102～108拷貝/μL範圍呈良好的線性關繫,產達0.99以上,溶解麯線分析錶明產物為特異的單峰.
근거GeneBank상궐어TCRα기인서렬설계병합성특이성인물,이궐어β-actin기인위내삼,채용RT-PCR방법종궐어적흉선총RNA중확증득도궐어TCRα화β-ctin기인,장목적편단순화후극륭도PMD 18-T재체상,측서감정.이양성질립위표준품,채용SYBR GreenⅡ염료법진행실시형광정량PCR확증,구건표준곡선병진행용해곡선분석.결과표명,궐어TCRα기인적Ct치여표준품희석도재102～108고패/μL범위정량호적선성관계,산체0.99이상,용해곡선분석표명산물위특이적단봉.
