中国卫生检验杂志
中國衛生檢驗雜誌
중국위생검험잡지
CHINESE JOURNAL OF HEALTH LABORATORY TECHNOLOGY
2008年
10期
2033-2035
,共3页
呼吸道合胞病毒%融合蛋白%杆状病毒
呼吸道閤胞病毒%融閤蛋白%桿狀病毒
호흡도합포병독%융합단백%간상병독
目的:利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统表达RSV融合蛋白中主要抗原性区域的片段(第168～289氨基酸)并纯化重组蛋白.方法:在人胚肺二倍体细胞2BS株上培养RSV Long株,从培养物中提取病毒总核酸.采用RT-PCR法从RSV基因组RNA中扩增出F基因546-881 bp片段(F'),F'插入到转移载体质粒pBacPAK9中再与线性杆状病毒BacPAK6 DNA(Bsu36I digested)共转染Sf9昆虫细胞.重组蛋白经镍离子柱螯合亲和层析纯化.经SDS-PAGE和Western-Blot鉴定重组蛋白.结果:外源基因在昆虫细胞中获得了表达,并通过其所带的信号肽分泌到了无血清培养基中.表达产物的分子量约为15×103,与理论值相符.结论:成功地用昆虫细胞表达系统表达了能分泌到培养基中的呼吸道合胞病毒F基因546-881 bp片段编码的融合蛋白第168～289氨基酸片段.
目的:利用桿狀病毒-昆蟲細胞錶達繫統錶達RSV融閤蛋白中主要抗原性區域的片段(第168～289氨基痠)併純化重組蛋白.方法:在人胚肺二倍體細胞2BS株上培養RSV Long株,從培養物中提取病毒總覈痠.採用RT-PCR法從RSV基因組RNA中擴增齣F基因546-881 bp片段(F'),F'插入到轉移載體質粒pBacPAK9中再與線性桿狀病毒BacPAK6 DNA(Bsu36I digested)共轉染Sf9昆蟲細胞.重組蛋白經鎳離子柱螯閤親和層析純化.經SDS-PAGE和Western-Blot鑒定重組蛋白.結果:外源基因在昆蟲細胞中穫得瞭錶達,併通過其所帶的信號肽分泌到瞭無血清培養基中.錶達產物的分子量約為15×103,與理論值相符.結論:成功地用昆蟲細胞錶達繫統錶達瞭能分泌到培養基中的呼吸道閤胞病毒F基因546-881 bp片段編碼的融閤蛋白第168～289氨基痠片段.
목적:이용간상병독-곤충세포표체계통표체RSV융합단백중주요항원성구역적편단(제168～289안기산)병순화중조단백.방법:재인배폐이배체세포2BS주상배양RSV Long주,종배양물중제취병독총핵산.채용RT-PCR법종RSV기인조RNA중확증출F기인546-881 bp편단(F'),F'삽입도전이재체질립pBacPAK9중재여선성간상병독BacPAK6 DNA(Bsu36I digested)공전염Sf9곤충세포.중조단백경얼리자주오합친화층석순화.경SDS-PAGE화Western-Blot감정중조단백.결과:외원기인재곤충세포중획득료표체,병통과기소대적신호태분비도료무혈청배양기중.표체산물적분자량약위15×103,여이론치상부.결론:성공지용곤충세포표체계통표체료능분비도배양기중적호흡도합포병독F기인546-881 bp편단편마적융합단백제168～289안기산편단.
