中华医学杂志
中華醫學雜誌
중화의학잡지
National Medical Journal of China
2006年
32期
2246-2251
,共6页
孙建荣%张晓红%何智文%古莹%虞瑛姿%方永明%吕庆华%董庆华%徐荣臻
孫建榮%張曉紅%何智文%古瑩%虞瑛姿%方永明%呂慶華%董慶華%徐榮臻
손건영%장효홍%하지문%고형%우영자%방영명%려경화%동경화%서영진
小檗胺%p210 bcr/abl蛋白%热休克蛋白90%白血病,髓样,慢性%脱噬作用
小檗胺%p210 bcr/abl蛋白%熱休剋蛋白90%白血病,髓樣,慢性%脫噬作用
소벽알%p210 bcr/abl단백%열휴극단백90%백혈병,수양,만성%탈서작용
目的 研究新型p210 bcr/abl抑制剂小檗胺诱导人慢性粒细胞白血病细胞凋亡分子的机制.方法 培养表达内源性p210 bcr/abl蛋白的Ph+人慢性粒细胞白血病细胞系K562,用小檗胺按指定时间和剂量干预细胞.应用膜联蛋白荧光素(Annexin-V-Fluos)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)试剂盒和流式细胞术定量分析凋亡细胞百分比;用cytoperm/cytofix和天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白水解酶-3-McAb-PE定量检测含活化天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)细胞百分比;以免疫共沉淀技术(c-abl抗体)和Western印迹[p-Tyr(pY99)抗体]定量分析p210 bcr/abl蛋白磷酸化;p210 bcr/abl蛋白总量直接用Western印迹(c-abl抗体)检测;Hsp90和Hsp70等分子伴侣蛋白水平的变化用Western印迹(Hsp90和Hsp70抗体).结果 48 h IC50浓度小檗胺(8μg/ml)作用48 h后,45.69% K562白血病细胞表达活化的Caspase-3凋亡分子和48.43%白血病细胞发生凋亡.免疫印迹和免疫共沉淀结果显示,低剂量小檗胺可明显抑制白血病细胞内p210 bcr/abl磷酸化:8μg/ml浓度小檗胺处理6 h后,白血病细胞磷酸化p210 bcr/abl蛋白含量仅为对照组的8.41%,而p210 bcr/abl蛋白总量并无变化.小檗胺还能直接下调p210 bcr/abl分子伴侣Hsp90蛋白水平:白血病细胞经8μg/ml浓度小檗胺处理24h时的Hsp90水平只有对照组的18.37%,而且对能诱导白血病细胞产生凋亡抵抗的Hsp70蛋白水平影响不明显.结论 (1)小檗胺是一种新型p210 bcr/abl蛋白磷酸化抑制剂,能通过抑制p210 bcr/abl蛋白磷酸化和诱导Caspase-3通路介导的Ph+白血病细胞发生凋亡;(2)与已知Hsp90抑制剂格尔德霉素(GA)不同,小檗胺能直接下调Hsp90蛋白水平,而对与肿瘤细胞凋亡抵抗有关的Hsp70蛋白表达影响不大,这提示小檗胺可能还是一种新型蛋白分子伴侣Hsp90抑制剂,值得进一步研究.
目的 研究新型p210 bcr/abl抑製劑小檗胺誘導人慢性粒細胞白血病細胞凋亡分子的機製.方法 培養錶達內源性p210 bcr/abl蛋白的Ph+人慢性粒細胞白血病細胞繫K562,用小檗胺按指定時間和劑量榦預細胞.應用膜聯蛋白熒光素(Annexin-V-Fluos)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)試劑盒和流式細胞術定量分析凋亡細胞百分比;用cytoperm/cytofix和天鼕氨痠特異的半胱氨痠蛋白水解酶-3-McAb-PE定量檢測含活化天鼕氨痠特異的半胱氨痠蛋白水解酶-3(Caspase-3)細胞百分比;以免疫共沉澱技術(c-abl抗體)和Western印跡[p-Tyr(pY99)抗體]定量分析p210 bcr/abl蛋白燐痠化;p210 bcr/abl蛋白總量直接用Western印跡(c-abl抗體)檢測;Hsp90和Hsp70等分子伴侶蛋白水平的變化用Western印跡(Hsp90和Hsp70抗體).結果 48 h IC50濃度小檗胺(8μg/ml)作用48 h後,45.69% K562白血病細胞錶達活化的Caspase-3凋亡分子和48.43%白血病細胞髮生凋亡.免疫印跡和免疫共沉澱結果顯示,低劑量小檗胺可明顯抑製白血病細胞內p210 bcr/abl燐痠化:8μg/ml濃度小檗胺處理6 h後,白血病細胞燐痠化p210 bcr/abl蛋白含量僅為對照組的8.41%,而p210 bcr/abl蛋白總量併無變化.小檗胺還能直接下調p210 bcr/abl分子伴侶Hsp90蛋白水平:白血病細胞經8μg/ml濃度小檗胺處理24h時的Hsp90水平隻有對照組的18.37%,而且對能誘導白血病細胞產生凋亡牴抗的Hsp70蛋白水平影響不明顯.結論 (1)小檗胺是一種新型p210 bcr/abl蛋白燐痠化抑製劑,能通過抑製p210 bcr/abl蛋白燐痠化和誘導Caspase-3通路介導的Ph+白血病細胞髮生凋亡;(2)與已知Hsp90抑製劑格爾德黴素(GA)不同,小檗胺能直接下調Hsp90蛋白水平,而對與腫瘤細胞凋亡牴抗有關的Hsp70蛋白錶達影響不大,這提示小檗胺可能還是一種新型蛋白分子伴侶Hsp90抑製劑,值得進一步研究.
목적 연구신형p210 bcr/abl억제제소벽알유도인만성립세포백혈병세포조망분자적궤제.방법 배양표체내원성p210 bcr/abl단백적Ph+인만성립세포백혈병세포계K562,용소벽알안지정시간화제량간예세포.응용막련단백형광소(Annexin-V-Fluos)/전화병정(propidium iodide,PI)시제합화류식세포술정량분석조망세포백분비;용cytoperm/cytofix화천동안산특이적반광안산단백수해매-3-McAb-PE정량검측함활화천동안산특이적반광안산단백수해매-3(Caspase-3)세포백분비;이면역공침정기술(c-abl항체)화Western인적[p-Tyr(pY99)항체]정량분석p210 bcr/abl단백린산화;p210 bcr/abl단백총량직접용Western인적(c-abl항체)검측;Hsp90화Hsp70등분자반려단백수평적변화용Western인적(Hsp90화Hsp70항체).결과 48 h IC50농도소벽알(8μg/ml)작용48 h후,45.69% K562백혈병세포표체활화적Caspase-3조망분자화48.43%백혈병세포발생조망.면역인적화면역공침정결과현시,저제량소벽알가명현억제백혈병세포내p210 bcr/abl린산화:8μg/ml농도소벽알처리6 h후,백혈병세포린산화p210 bcr/abl단백함량부위대조조적8.41%,이p210 bcr/abl단백총량병무변화.소벽알환능직접하조p210 bcr/abl분자반려Hsp90단백수평:백혈병세포경8μg/ml농도소벽알처리24h시적Hsp90수평지유대조조적18.37%,이차대능유도백혈병세포산생조망저항적Hsp70단백수평영향불명현.결론 (1)소벽알시일충신형p210 bcr/abl단백린산화억제제,능통과억제p210 bcr/abl단백린산화화유도Caspase-3통로개도적Ph+백혈병세포발생조망;(2)여이지Hsp90억제제격이덕매소(GA)불동,소벽알능직접하조Hsp90단백수평,이대여종류세포조망저항유관적Hsp70단백표체영향불대,저제시소벽알가능환시일충신형단백분자반려Hsp90억제제,치득진일보연구.
