微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2008年
12期
1642-1648
,共7页
猪链球菌2型%PCR检测%Transfer protein G(TRAG)%鉴定
豬鏈毬菌2型%PCR檢測%Transfer protein G(TRAG)%鑒定
저련구균2형%PCR검측%Transfer protein G(TRAG)%감정
[目的]trag(transfergene G)是利用IVIAT(in vivo induced antigen technology)通量筛选鉴定的猪链球菌2型(Strertococcus suis type 2,SS2)感染相关因子,研究该基因在猪链球菌(Strertococcus suis,SS)中的分布情况,研究康复血清与免疫血清在免疫印迹中的反应性有无,间接证明其在体内感染与体外培养时表达差异.[方法]鉴于我国分离株trag 与GenBank公布的SS2北美株89/1591的trag序列有95.8%的同源性,据此设计和合成一对检测引物,对SS2我国江苏及四川流行株、其他临床分离株和参考株及SS1、SS1/2、SS9、SS7及C群猪源链球菌共43株进行PCR扩增.另设计一对引物,扩增5株SS代表菌株trag的完整阅读框,并对扩增产物进行测序.据软件分析后,选择TRAG(Transfer Protein G)免疫原性良好的区域片段的核酸设计表达引物,PCR扩增后定向克隆至表达载体pET28a(+)构建表达质粒,表达蛋白转印到PVDF膜上,分别与SS2猪康复血清和猪高免血清反应.结果 trag庄SS2中94%(30132)阳性,SS9中67%(416)阳性,557阳性,SS1、SS1/2及C群菌阴性.5株细菌TRAG的氨基酸序列与SS2中国株98HAH33、05ZYH33及北美株8911591同源性>97%.所获得重组蛋白只能被康复血清识别.[结论]从SS致病株中检出感染相关基因trag,提示该基因可能与SS致病性有关,重组蛋白的免疫转印结果表明,TRAG可能与SS2体内感染相关.
[目的]trag(transfergene G)是利用IVIAT(in vivo induced antigen technology)通量篩選鑒定的豬鏈毬菌2型(Strertococcus suis type 2,SS2)感染相關因子,研究該基因在豬鏈毬菌(Strertococcus suis,SS)中的分佈情況,研究康複血清與免疫血清在免疫印跡中的反應性有無,間接證明其在體內感染與體外培養時錶達差異.[方法]鑒于我國分離株trag 與GenBank公佈的SS2北美株89/1591的trag序列有95.8%的同源性,據此設計和閤成一對檢測引物,對SS2我國江囌及四川流行株、其他臨床分離株和參攷株及SS1、SS1/2、SS9、SS7及C群豬源鏈毬菌共43株進行PCR擴增.另設計一對引物,擴增5株SS代錶菌株trag的完整閱讀框,併對擴增產物進行測序.據軟件分析後,選擇TRAG(Transfer Protein G)免疫原性良好的區域片段的覈痠設計錶達引物,PCR擴增後定嚮剋隆至錶達載體pET28a(+)構建錶達質粒,錶達蛋白轉印到PVDF膜上,分彆與SS2豬康複血清和豬高免血清反應.結果 trag莊SS2中94%(30132)暘性,SS9中67%(416)暘性,557暘性,SS1、SS1/2及C群菌陰性.5株細菌TRAG的氨基痠序列與SS2中國株98HAH33、05ZYH33及北美株8911591同源性>97%.所穫得重組蛋白隻能被康複血清識彆.[結論]從SS緻病株中檢齣感染相關基因trag,提示該基因可能與SS緻病性有關,重組蛋白的免疫轉印結果錶明,TRAG可能與SS2體內感染相關.
[목적]trag(transfergene G)시이용IVIAT(in vivo induced antigen technology)통량사선감정적저련구균2형(Strertococcus suis type 2,SS2)감염상관인자,연구해기인재저련구균(Strertococcus suis,SS)중적분포정황,연구강복혈청여면역혈청재면역인적중적반응성유무,간접증명기재체내감염여체외배양시표체차이.[방법]감우아국분리주trag 여GenBank공포적SS2북미주89/1591적trag서렬유95.8%적동원성,거차설계화합성일대검측인물,대SS2아국강소급사천류행주、기타림상분리주화삼고주급SS1、SS1/2、SS9、SS7급C군저원련구균공43주진행PCR확증.령설계일대인물,확증5주SS대표균주trag적완정열독광,병대확증산물진행측서.거연건분석후,선택TRAG(Transfer Protein G)면역원성량호적구역편단적핵산설계표체인물,PCR확증후정향극륭지표체재체pET28a(+)구건표체질립,표체단백전인도PVDF막상,분별여SS2저강복혈청화저고면혈청반응.결과 trag장SS2중94%(30132)양성,SS9중67%(416)양성,557양성,SS1、SS1/2급C군균음성.5주세균TRAG적안기산서렬여SS2중국주98HAH33、05ZYH33급북미주8911591동원성>97%.소획득중조단백지능피강복혈청식별.[결론]종SS치병주중검출감염상관기인trag,제시해기인가능여SS치병성유관,중조단백적면역전인결과표명,TRAG가능여SS2체내감염상관.
