CAJ | 학술논문

尿酸氧化酶(urate oxidase; EC 1.7.3.3)能够降解尿酸形成尿囊素,在嘌呤代谢途径中起到至关重要的作用.用生物信息学方法在家蚕基因组数据库中进行同源性检索,获得一条可能的家蚕尿酸氧化酶序列,根据预测序列设计引物及克隆、测序验证,已成功地克隆到家蚕尿酸氧化酶基因BmUo的完整ORF.克隆的cDNA (Gen-Bank登录号:DQ189992)全长1088bp,ORF长1014bp,编码337个氨基酸残基,预测分子质量为38.18kD,等电点为6.90.通过半定量RT-PCR检测了该基因在各组织的表达情况,发现该基因的mRNA在5龄第3天的家蚕的脂肪体和马氏管中有表达.该基因在氨基酸水平上与果蝇、按蚊尿酸氧化酶的相似性分别为45.6%和51%,在第91个氨基酸残基处具有Asn-Ser-X-Val/Ile-Val/Ile-Ala/Pro-Thr-Asp-Ser/Thr-X-Lys-Asn的高度保守序列,这一序列在真核生物和原核生物中均广泛存在,可能与尿酸氧化酶的酶活性有关.家蚕尿酸氧化酶与其他38个物种尿酸氧化酶的聚类分析发现,尿酸氧化酶基因在昆虫、真菌、双子叶植物和哺乳动物这一层面上是相对保守的.将BmUo基因片段与pET-28a连接,构建原核表达载体pET-28a/uo,重组载体转化大肠杆菌BL21后,在37℃的培养条件下可检测到与理论分子质量相符的蛋白条带.
뇨산양화매(urate oxidase; EC 1.7.3.3)능구강해뇨산형성뇨낭소,재표령대사도경중기도지관중요적작용.용생물신식학방법재가잠기인조수거고중진행동원성검색,획득일조가능적가잠뇨산양화매서렬,근거예측서렬설계인물급극륭、측서험증,이성공지극륭도가잠뇨산양화매기인BmUo적완정ORF.극륭적cDNA (Gen-Bank등록호:DQ189992)전장1088bp,ORF장1014bp,편마337개안기산잔기,예측분자질량위38.18kD,등전점위6.90.통과반정량RT-PCR검측료해기인재각조직적표체정황,발현해기인적mRNA재5령제3천적가잠적지방체화마씨관중유표체.해기인재안기산수평상여과승、안문뇨산양화매적상사성분별위45.6%화51%,재제91개안기산잔기처구유Asn-Ser-X-Val/Ile-Val/Ile-Ala/Pro-Thr-Asp-Ser/Thr-X-Lys-Asn적고도보수서렬,저일서렬재진핵생물화원핵생물중균엄범존재,가능여뇨산양화매적매활성유관.가잠뇨산양화매여기타38개물충뇨산양화매적취류분석발현,뇨산양화매기인재곤충、진균、쌍자협식물화포유동물저일층면상시상대보수적.장BmUo기인편단여pET-28a련접,구건원핵표체재체pET-28a/uo,중조재체전화대장간균BL21후,재37℃적배양조건하가검측도여이론분자질량상부적단백조대.