中国实验诊断学
中國實驗診斷學
중국실험진단학
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
2011年
1期
11-14
,共4页
刘建巨%关继奎%王琳%赵秀梅%郑建秋%李丹%闫庆慧
劉建巨%關繼奎%王琳%趙秀梅%鄭建鞦%李丹%閆慶慧
류건거%관계규%왕림%조수매%정건추%리단%염경혜
Vasostatin(120-180aa)%293T细胞%基因克隆%真核表达
Vasostatin(120-180aa)%293T細胞%基因剋隆%真覈錶達
Vasostatin(120-180aa)%293T세포%기인극륭%진핵표체
目的 构建真核表达质粒PcDNA3.1(+)-带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)并了解其在体内外真核细胞中的表达.方法 将带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)的逆转录聚合酶链式反应 (RT-PCR)产物克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体上,经酶切鉴定及测序分析证明构建成功后,以脂质体介导法转染体外培养的真核293T细胞及注射入鼠骨骼肌细胞中,了解其在体内外真核细胞中的表达情况.结果 我们获取了包含带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)成熟肽及HA抗原在内的一段cDNA片段,并成功地与真核表达载体PcDNA3.1(+)连接,经测序表明,其中含有的带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)成熟肽的序列与Genebank上报道的序列完全一致.即我们成功构建了真核表达质粒PcDNA3.1(+)-带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa).之后,在转染了该质粒的体外真核293T细胞的上清液中及骨骼肌注射了该质粒的鼠血液中,利用Western-blot法检测到了目的 基因的蛋白质.结论 带有白蛋白信号肽的真核表达质粒PcDNA3.1(+)-Vasostatin(120-180aa)增强了蛋白分泌表达能力,这为进一步应用该质粒治疗全身新生血管类病奠定了一定基础.
目的 構建真覈錶達質粒PcDNA3.1(+)-帶有白蛋白信號肽的Vasostatin(120-180aa)併瞭解其在體內外真覈細胞中的錶達.方法 將帶有白蛋白信號肽的Vasostatin(120-180aa)的逆轉錄聚閤酶鏈式反應 (RT-PCR)產物剋隆至pcDNA3.1(+)真覈錶達載體上,經酶切鑒定及測序分析證明構建成功後,以脂質體介導法轉染體外培養的真覈293T細胞及註射入鼠骨骼肌細胞中,瞭解其在體內外真覈細胞中的錶達情況.結果 我們穫取瞭包含帶有白蛋白信號肽的Vasostatin(120-180aa)成熟肽及HA抗原在內的一段cDNA片段,併成功地與真覈錶達載體PcDNA3.1(+)連接,經測序錶明,其中含有的帶有白蛋白信號肽的Vasostatin(120-180aa)成熟肽的序列與Genebank上報道的序列完全一緻.即我們成功構建瞭真覈錶達質粒PcDNA3.1(+)-帶有白蛋白信號肽的Vasostatin(120-180aa).之後,在轉染瞭該質粒的體外真覈293T細胞的上清液中及骨骼肌註射瞭該質粒的鼠血液中,利用Western-blot法檢測到瞭目的 基因的蛋白質.結論 帶有白蛋白信號肽的真覈錶達質粒PcDNA3.1(+)-Vasostatin(120-180aa)增彊瞭蛋白分泌錶達能力,這為進一步應用該質粒治療全身新生血管類病奠定瞭一定基礎.
목적 구건진핵표체질립PcDNA3.1(+)-대유백단백신호태적Vasostatin(120-180aa)병료해기재체내외진핵세포중적표체.방법 장대유백단백신호태적Vasostatin(120-180aa)적역전록취합매련식반응 (RT-PCR)산물극륭지pcDNA3.1(+)진핵표체재체상,경매절감정급측서분석증명구건성공후,이지질체개도법전염체외배양적진핵293T세포급주사입서골격기세포중,료해기재체내외진핵세포중적표체정황.결과 아문획취료포함대유백단백신호태적Vasostatin(120-180aa)성숙태급HA항원재내적일단cDNA편단,병성공지여진핵표체재체PcDNA3.1(+)련접,경측서표명,기중함유적대유백단백신호태적Vasostatin(120-180aa)성숙태적서렬여Genebank상보도적서렬완전일치.즉아문성공구건료진핵표체질립PcDNA3.1(+)-대유백단백신호태적Vasostatin(120-180aa).지후,재전염료해질립적체외진핵293T세포적상청액중급골격기주사료해질립적서혈액중,이용Western-blot법검측도료목적 기인적단백질.결론 대유백단백신호태적진핵표체질립PcDNA3.1(+)-Vasostatin(120-180aa)증강료단백분비표체능력,저위진일보응용해질립치료전신신생혈관류병전정료일정기출.
