生物学杂志
生物學雜誌
생물학잡지
JOURNAL OF BIOLOGY
2011年
5期
50-54
,共5页
香蕉条斑病毒%原核表达%ELISA%western blotting
香蕉條斑病毒%原覈錶達%ELISA%western blotting
향초조반병독%원핵표체%ELISA%western blotting
以课题组保存的连接在pMD-18T载体上的香蕉条斑病毒河口分离物全基因组为模板,设计一对特异引物,经过PCR扩增,切胶回收,并通过与pET32(b)载体共同双酶切及T4连接酶连接,得到重组载体pET32-ORF2.将获得的重组质粒pET32-ORF2转化表达菌株E.coli BL21(DE3)感受态细胞,得到表达BSV的ORFⅡ的工程菌.经0.1mmol/L的IPTG诱导表达,超声波破碎后,获得的融合蛋白大多为包含体,但仍有少部分为可溶性蛋白可以进行后续的纯化步骤.将上述可溶性融合蛋白通过Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,获得纯度较高的融合蛋白.以纯化蛋白作为抗原免疫家兔,得到特异性抗血清.间接ELISA以及western blotting表明,所得抗血清效价和特异性都较高,可以用于检测.为BSV的快速检测以及一些相关后续理论研究工作奠定了一定基础.
以課題組保存的連接在pMD-18T載體上的香蕉條斑病毒河口分離物全基因組為模闆,設計一對特異引物,經過PCR擴增,切膠迴收,併通過與pET32(b)載體共同雙酶切及T4連接酶連接,得到重組載體pET32-ORF2.將穫得的重組質粒pET32-ORF2轉化錶達菌株E.coli BL21(DE3)感受態細胞,得到錶達BSV的ORFⅡ的工程菌.經0.1mmol/L的IPTG誘導錶達,超聲波破碎後,穫得的融閤蛋白大多為包含體,但仍有少部分為可溶性蛋白可以進行後續的純化步驟.將上述可溶性融閤蛋白通過Ni2+-NTA親和層析柱純化,穫得純度較高的融閤蛋白.以純化蛋白作為抗原免疫傢兔,得到特異性抗血清.間接ELISA以及western blotting錶明,所得抗血清效價和特異性都較高,可以用于檢測.為BSV的快速檢測以及一些相關後續理論研究工作奠定瞭一定基礎.
이과제조보존적련접재pMD-18T재체상적향초조반병독하구분리물전기인조위모판,설계일대특이인물,경과PCR확증,절효회수,병통과여pET32(b)재체공동쌍매절급T4련접매련접,득도중조재체pET32-ORF2.장획득적중조질립pET32-ORF2전화표체균주E.coli BL21(DE3)감수태세포,득도표체BSV적ORFⅡ적공정균.경0.1mmol/L적IPTG유도표체,초성파파쇄후,획득적융합단백대다위포함체,단잉유소부분위가용성단백가이진행후속적순화보취.장상술가용성융합단백통과Ni2+-NTA친화층석주순화,획득순도교고적융합단백.이순화단백작위항원면역가토,득도특이성항혈청.간접ELISA이급western blotting표명,소득항혈청효개화특이성도교고,가이용우검측.위BSV적쾌속검측이급일사상관후속이론연구공작전정료일정기출.
