CAJ | 학술논문

为制备抗东方马脑炎病毒(EEEV)结构蛋白E2的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究以Bac-to-Bac真核表达系统表达EEEV E2蛋白,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合.以原核表达载体pET-30a表达并纯化的EEEV E2蛋白作为包被抗原建立间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,获得4株稳定分泌抗EEEV E2蛋白MAbs的杂交瘤细胞株,分别命名为6F3、6F11、7C11、8B11.Western blot与间接免疫荧光试验结果表明,获得的4株MAbs均与EEEV呈阳性反应,而与西方马脑炎病毒、乙型脑炎病毒以及登革热病毒1型～4型呈阴性反应.利用部分重叠的原核表达的短肽对E2蛋白抗原表位进行鉴定,初步确定MAb 6F11、7C11和8B11识别的抗原表位均为E-33 (321EGLEYTWGNHPPKRVW336),而MAb 6F3无短肽与其反应,推测可能为构象表位.本研究结果为建立EEEV型特异性检测方法、研究E2蛋白结构功能及该病的进一步防制奠定了基础.
위제비항동방마뇌염병독(EEEV)결구단백E2적단극륭항체(MAb)병감정기항원표위,본연구이Bac-to-Bac진핵표체계통표체EEEV E2단백,순화후작위면역원면역BALB/c소서,취기비림파세포여소서골수류세포SP2/0진행융합.이원핵표체재체pET-30a표체병순화적EEEV E2단백작위포피항원건립간접ELISA방법사선잡교류세포,획득4주은정분비항EEEV E2단백MAbs적잡교류세포주,분별명명위6F3、6F11、7C11、8B11.Western blot여간접면역형광시험결과표명,획득적4주MAbs균여EEEV정양성반응,이여서방마뇌염병독、을형뇌염병독이급등혁열병독1형～4형정음성반응.이용부분중첩적원핵표체적단태대E2단백항원표위진행감정,초보학정MAb 6F11、7C11화8B11식별적항원표위균위E-33 (321EGLEYTWGNHPPKRVW336),이MAb 6F3무단태여기반응,추측가능위구상표위.본연구결과위건립EEEV형특이성검측방법、연구E2단백결구공능급해병적진일보방제전정료기출.