中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
3期
36-41
,共6页
王光华%蔺国珍%郑福英%曹小安%宫晓炜%周继章%邱昌庆
王光華%藺國珍%鄭福英%曹小安%宮曉煒%週繼章%邱昌慶
왕광화%린국진%정복영%조소안%궁효위%주계장%구창경
D型产气荚膜梭菌%ε毒素%类毒素%免疫保护
D型產氣莢膜梭菌%ε毒素%類毒素%免疫保護
D형산기협막사균%ε독소%류독소%면역보호
利用PCR技术,从D型产气荚膜梭菌标准株(C60-2)染色体DNA中扩增出ε毒素基因.该基因产物大小为906bp,序列分析结果表明,与GenBank报道的产气荚膜梭菌参考菌株ε毒素基因序列同源性大于99.将扩增的ε毒素基因定向克隆到原核表达载体pET32a中,得到重组质粒pET32a-ETX,将重组质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3) plys中,经IPTG诱导后,SDS PAGE分析可见大小为54 ku的特异条带；经Western blotting和ELISA检测结果表明,表达的ε毒素能与抗天然ε毒素抗体发生特异性反应,说明ε毒素蛋白具有较好的反应原性.将表达的ε毒素蛋白用0.4％的甲醛溶液制成类毒素疫苗,免疫小鼠后,具有一定的保护力,这表明该重组菌株有望成为产气荚膜梭菌基因工程类毒素疫苗的候选菌株.
利用PCR技術,從D型產氣莢膜梭菌標準株(C60-2)染色體DNA中擴增齣ε毒素基因.該基因產物大小為906bp,序列分析結果錶明,與GenBank報道的產氣莢膜梭菌參攷菌株ε毒素基因序列同源性大于99.將擴增的ε毒素基因定嚮剋隆到原覈錶達載體pET32a中,得到重組質粒pET32a-ETX,將重組質粒轉化大腸桿菌BL21 (DE3) plys中,經IPTG誘導後,SDS PAGE分析可見大小為54 ku的特異條帶；經Western blotting和ELISA檢測結果錶明,錶達的ε毒素能與抗天然ε毒素抗體髮生特異性反應,說明ε毒素蛋白具有較好的反應原性.將錶達的ε毒素蛋白用0.4％的甲醛溶液製成類毒素疫苗,免疫小鼠後,具有一定的保護力,這錶明該重組菌株有望成為產氣莢膜梭菌基因工程類毒素疫苗的候選菌株.
이용PCR기술,종D형산기협막사균표준주(C60-2)염색체DNA중확증출ε독소기인.해기인산물대소위906bp,서렬분석결과표명,여GenBank보도적산기협막사균삼고균주ε독소기인서렬동원성대우99.장확증적ε독소기인정향극륭도원핵표체재체pET32a중,득도중조질립pET32a-ETX,장중조질립전화대장간균BL21 (DE3) plys중,경IPTG유도후,SDS PAGE분석가견대소위54 ku적특이조대；경Western blotting화ELISA검측결과표명,표체적ε독소능여항천연ε독소항체발생특이성반응,설명ε독소단백구유교호적반응원성.장표체적ε독소단백용0.4％적갑철용액제성류독소역묘,면역소서후,구유일정적보호력,저표명해중조균주유망성위산기협막사균기인공정류독소역묘적후선균주.
